黃單胞菌α-淀粉酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究采用巴氏畢赤酵母分泌表達(dá)載體pPIC9K實(shí)現(xiàn)了野油菜黃單胞菌α-淀粉酶基因在巴氏畢赤酵母GS115中的表達(dá)和分泌.從質(zhì)粒pB16中以PCR方法擴(kuò)增出去除5'端的信號肽序列的野油菜黃單胞菌α-淀粉酶基因,將PCR產(chǎn)物以EcoRI位點(diǎn)克隆到大腸桿菌克隆質(zhì)粒載體pBluescript(KS)上,構(gòu)建成中間載體pKSXA.從中間載體pKSXA上用EcoRI將α-淀粉酶基因片段切下來,并與EcoRI消化的Pichia pastoris分泌表

2、達(dá)載體Ppic9K連接,構(gòu)建成α-淀粉酶基因表達(dá)質(zhì)粒pPICXA.以SalI從his4基因間切斷以線性化pPICXA,得到的線狀DNA用電轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入Pichia pastoris GS115,篩選His<'+>,表型的重組菌株,得到重組菌GSXA.在YPMSP平板上的生長顯示：GSXA表現(xiàn)出明顯的分泌性的淀粉水解酶活,性而GS115沒有這樣的活性.用早醇誘導(dǎo)GSXA搖瓶培養(yǎng)液的酶活測定結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了α-淀粉酶基因在重組酵母GSXA

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