湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子iELISA診斷方法的建立.pdf

1、分類號華中農業(yè)大學碩士研究生學位論文湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子逐LISA診斷方法的建立MolecularPhylogeneticstudiesonThe刁沁riasergen吞inHubeiPrevineeandEstablishmentofmolecularindireetELISAmethodsfordiagnosingTheileriosis碩士研究生:趙金華指導教師:趙俊龍教授指導小組:趙俊龍教授姚寶安教授周艷琴副教

2、授專業(yè):預防獸醫(yī)學獲得學位名稱:農學碩士研究方向:寄生蟲免疫獲得學位時間:2008年6月華中農業(yè)大學動物醫(yī)學院二00八年六月湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子iEllSA診斷方法的建立3.1研究的目的意義.........................................……，.................................................……433.2試驗材料............

3、.................................................................................................……433.2.1質粒與菌株....................................................................................................……433.2.2

4、主要藥品及試劑..........................................................................................……443.2.3主要試劑及溶液的配制...............................................................................……453.3試驗方法..............

5、...............................................................................................……463.3.1重組表達質粒的構建及鑒定........................................................................……463.3.2重組表達質粒在BL21一CodonPlus中的

6、誘導表達......................................……473.3.3最佳誘導表達條件的確定...........................................................................……473.3.4表達產物存在形式的檢測...............................................................

7、............……473.3.5可溶性表達產物的提取...............................................................................……473.3.6不溶性表達產物(包涵體)的提取和復性...............................................……483.3.7SDS一PAGE電泳.................

8、...........................................................................……483.3.8認estem一blot試驗..........................................................................................……483.4結果與分析.....................

9、.....................……，.........................................................……493.4.1pGEx一KG一P33與pGEx一KG一p23重組表達質粒的構建及原核表達....……493.4.2PE不28a一P33與pET28a一p23兩種重組表達質粒的構建及原核表達....……56第四章牛泰勒蟲病分子間接ELIsA診斷方法的建立及初步應用二“”“““

10、““““““….“4.1研究的目的意義.................................................................................................……654.1.1材料與方法..........................................................................................

11、..........……“4.1.2試驗方法........................................................................................................……664.2結果與分析..................................................................................

12、.......................……704.2.1酶標反應板均一性的測定.....................................……，.............................……704.2.2GST一P33和GST一p23兩種融合蛋白ELIsA方法的建立........................……704.2.3His一P33和His一p23分子間接EuSA診斷方法的建立.....

13、........................……724.2.4間接EUSA的特異性試驗.........................................................................……824.2.5His一p33P23間接ELISA的重復性檢測....................................................……844.2.6His一P33幣2

14、3間接EUSA敏感性試驗........................................................……864.2.7His一P33間接EllSA和His一p23間接EusA檢測牛體內瑟氏泰勒蟲特異性抗體的水平.................................................................................................

15、............……864.2.8His一P33和His一p23包被EuSA板的保質期試驗..................................……884.2.9His一P33和His一23兩種蛋白間接EUSA方法的臨床初步應用.........……884.2.10His一P33、His一p23兩種蛋白單獨包被的EUSA與兩種蛋白混合后包被進行ELISA試驗的比較..........................