帕金森氏病動物模型的建立和FLZ抑制神經(jīng)炎癥機制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 脂多糖加重α-synuclein基因突變小鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷機制的研究。
　　帕金森氏病(Parkinson's disease，PD)是由遺傳和炎癥等多種病因引起的神經(jīng)退行性疾病。有多種可模擬PD發(fā)病的動物模型，α-synuclein(A53T)轉(zhuǎn)基因小鼠和脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)腹腔注射小鼠分別從基因突變和炎癥角度模擬PD的病理改變，但這些模型

2、僅模擬PD發(fā)病的單一因素，且出現(xiàn)病理改變的時間較長。本實驗采用LPS注射α-synuclein轉(zhuǎn)基因小鼠建立炎癥和遺傳因素雙重打擊的PD模型。結(jié)果顯示LPS聯(lián)合α-synuclein轉(zhuǎn)基因刺激可導致小鼠轉(zhuǎn)棍和爬桿運動協(xié)調(diào)功能障礙，黑質(zhì)中酪氨酸羥化酶(TH)陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯降低，中腦TH的表達明顯下降，紋狀體中多巴胺含量顯著降低，出現(xiàn)多巴胺能神經(jīng)元功能低下的表現(xiàn)，以上行為學和病理改變均較二者單獨刺激明顯加重，表明聯(lián)合刺激可加重模型損傷，

3、表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。機制研究發(fā)現(xiàn)LPS聯(lián)合α-synuclein可引起明顯的神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡，表現(xiàn)為小膠質(zhì)細胞活化標志物Iba1表達增加以及與凋亡相關(guān)的Bcl2/Bax比值下降，細胞凋亡執(zhí)行的關(guān)鍵分子caspase-3活性升高。差異蛋白質(zhì)組學研究發(fā)現(xiàn)LPS和α-synuclein雙重打擊可導致小鼠腦中與炎癥和凋亡相關(guān)蛋白CD99抗原樣蛋白2(CD99L2)和細胞色素c氧化酶7A相關(guān)蛋白(COX7RP)的表達明顯增加，提示這兩種蛋白可能參

4、與PD的發(fā)病過程，它們在PD發(fā)病中的作用機制有待于進一步研究探討。以上研究表明在基因突變基礎(chǔ)上引入炎癥刺激可建立更理想的PD動物模型。
　　第二部分 FLz通過Src/PTEN/Akt信號通路抑制神經(jīng)炎癥的機制研究。
　　帕金森氏病(Parkinson's disease，PD)的發(fā)病與神經(jīng)炎癥密切相關(guān)，小膠質(zhì)細胞過度激活后可釋放細胞因子、化學因子和興奮性氨基酸等損傷周圍神經(jīng)元，導致神經(jīng)元死亡和丟失。研究發(fā)現(xiàn)抑制小膠質(zhì)細胞過

5、度活化引起的神經(jīng)炎癥對PD有改善作用，因此抑制神經(jīng)炎癥可能是治療PD的新策略。FLZ是番荔枝酰胺衍生物，臨床前研究表明FLZ具有治療PD的作用，現(xiàn)已進入Ⅰ期臨床研究。FLZ治療PD的作用與其抑制神經(jīng)炎癥而保護多巴胺能神經(jīng)元有關(guān)，但具體抗炎機制尚不不十分明確。因此，本研究采用LPS誘發(fā)的小膠質(zhì)細胞神經(jīng)炎癥模型探討FLZ抑制神經(jīng)炎癥的相關(guān)機制。結(jié)果顯示在LPS刺激的BV2細胞中，F(xiàn)LZ可明顯降低PTEN和Akt的磷酸化水平，PTEN的低磷酸

6、化狀態(tài)促使其由胞漿向胞膜轉(zhuǎn)位，從而提高PTEN磷脂酶活性，促進PIP3分解為PIP2，導致Akt活性下降。當用VOOH(pic)抑制PTEN活性后，F(xiàn)LZ對TNF-α的釋放量與LPS+VOOH(pic)組相比無明顯降低，表明PTEN可能在FLZ抑制炎癥中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)Src酪氨酸激酶是炎癥的重要調(diào)控蛋白，可調(diào)控PTEN的活性。本研究發(fā)現(xiàn)FLZ可明顯抑制Src和PTEN的相互作用。當抑制Src后FLZ對PTEN的磷酸化水平無明顯

7、影響，過表達Src后FLZ可明顯降低PTEN磷酸化水平，而抑制PTEN后FLZ仍可明顯降低Src磷酸化水平，表明Src在FLZ抗炎效應(yīng)中發(fā)揮重要作用，可能是PTEN的上游調(diào)控蛋白。進一步研究發(fā)現(xiàn)與LPS組相比，沉默Src后FLZ對Akt的磷酸化、TNF-α的釋放以及iNOS和COX-2的表達均無明顯影響，而過表達Src后與LPS組相比FLZ可顯著降低Akt的磷酸化、TNF-α的釋放以及iNOS和COX-2的表達，表明Src在FLZ抑制神