基質(zhì)金屬蛋白酶-9對(duì)多發(fā)性硬化復(fù)發(fā)診斷的臨床意義研究.pdf

1、1、目的：
　　多發(fā)性硬化（Multiple sclerosis. MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥脫髓鞘疾病，它的典型病理特征是炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、髓鞘脫失、軸索變性以及膠質(zhì)細(xì)胞增生等，目前許多研究表明多發(fā)性硬化早期即存在血腦屏障破壞。
　　基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases-9. MMP-9）是一類鋅離子依賴的蛋白酶，具有破壞血腦屏障，降解細(xì)胞外基質(zhì)、髓鞘堿性蛋白的作用，可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞

2、通透性增高，進(jìn)而導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞穿透血管基底膜進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。MS血腦屏障的破壞、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、髓鞘降解以及軸索的損傷等主要病理過(guò)程均與MMP-9活性異常增高有關(guān)。
　　頸椎病神經(jīng)根型發(fā)病率為50-60％，是由于頸椎間盤向側(cè)后方突出、關(guān)節(jié)增生及肥大，刺激或壓迫神經(jīng)根所致。臨床上開(kāi)始多為頸肩痛，并向上肢放射，皮膚可有麻木、過(guò)敏等感覺(jué)異常，頸椎病神經(jīng)根型臨床表現(xiàn)與多發(fā)性硬化頗為相似。
　　血腦屏障破壞在MS的病理生理中

3、起重要作用，血管通透性的改變?cè)缬贛S影像學(xué)的特征性變化。核磁共振(MRI)增強(qiáng)掃描可見(jiàn)活動(dòng)性病灶強(qiáng)化，這與病變血管周圍炎性改變，血腦屏障破壞，血管通透性升高，造影劑外滲有關(guān)，MMP-9是引起血腦屏障破壞的重要因素，MS患者外周血MMP-9突然升高與新病灶的形成有關(guān)，故推斷MS復(fù)發(fā)期較緩解期的MMP-9表達(dá)不同。
　　本研究旨在探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的檢測(cè)能否成為自身免疫性疾病多發(fā)性硬化（MS）復(fù)發(fā)-緩解型（R-R型）

4、和頸椎病神經(jīng)根型相鑒別的一種方法，以及MMP-9的檢測(cè)對(duì)判斷MS的復(fù)發(fā)和緩解是否具有臨床意義。
　　2、方法：
　　2.1、研究分組：
　　本研究分別對(duì)經(jīng)CT檢查、肌電圖檢查及核磁共振掃描已確診的MS（R-R型）患者26例（復(fù)發(fā)期和緩解期），頸椎病神經(jīng)根型患者30例（復(fù)發(fā)期和緩解期），正常對(duì)照組30例共5組分別抽取不加抗凝的靜脈血2ml送MMP-9檢測(cè)。
　　2.2、試驗(yàn)儀器：
　　MMP-9檢測(cè)所選用的設(shè)

5、備主要有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、數(shù)字顯示隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、移液槍、漩渦混合器、烘箱、分液器及微量電動(dòng)組織勻漿器等。
　　2.3、試驗(yàn)過(guò)程：
　　本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人MMP-9單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的MMP-9與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人MMP-9，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450n

6、m處測(cè)OD值，MMP-9濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中MMP-9濃度，將所獲得的數(shù)據(jù)再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　3、結(jié)果：
　　3.1、MS（R-R型）患者其復(fù)發(fā)期和緩解期的MMP-9分別與正常對(duì)照組MMP-9比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.2、頸椎病神經(jīng)根型患者其復(fù)發(fā)期和緩解期的MMP-9分別與正常對(duì)照組MMP-9比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.3、MS（R-R型）患者其復(fù)發(fā)期和緩解期的MMP-9分別

7、與頸椎病神經(jīng)根型患者其復(fù)發(fā)期和緩解期的MMP-9比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.4、MS患者的復(fù)發(fā)期與緩解期的MMP-9比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4、結(jié)論：
　　4.1、MMP-9的檢測(cè)對(duì)于MS（R-R型）和頸椎病神經(jīng)根型的鑒別具有臨床意義。
　　4.2、對(duì)于MS（R-R型）患者定期復(fù)查MMP-9可以早期判斷及預(yù)防有無(wú)疾病復(fù)發(fā)，為積極診斷及治療提供幫助。
　　4.3、MMP-9的檢測(cè)對(duì)于頸椎病神經(jīng)根型患者無(wú)現(xiàn)