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1、目的:1、通過(guò)Aβ1-42激活BV2細(xì)胞建立阿爾茨海默病小膠質(zhì)細(xì)胞炎性模型。2、通過(guò)檢測(cè)IL-1β,TNF-α的表達(dá),預(yù)測(cè)Aβ1-42誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞炎性反應(yīng)過(guò)程。3、姜黃素預(yù)處理后檢測(cè)IL-1β,TNF-α的表達(dá),判斷Aβ1-42誘導(dǎo)BV2細(xì)胞炎性反應(yīng)過(guò)程的變化。
方法:1、BV2小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)。2、模擬阿爾茨海默病小膠質(zhì)細(xì)胞炎性模型,用不同濃度的Aβ1-42誘導(dǎo)細(xì)胞活化,通過(guò)MTT檢測(cè)BV2細(xì)胞的活力及酶聯(lián)免疫吸附試
2、驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)炎性反應(yīng)過(guò)程中IL-1β及TNF-α的分泌。選擇適宜濃度Aβ1-42進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。3、應(yīng)用該濃度Aβ1-42處理BV2細(xì)胞,通過(guò)細(xì)胞免疫組化來(lái)判斷BV2細(xì)胞是否被激活。4、應(yīng)用該濃度Aβ1-42處理BV2細(xì)胞,不同時(shí)間酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)炎性反應(yīng)過(guò)程中IL-1β及TNF-α的分泌。選擇適宜時(shí)間進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。5、用不同濃度的姜黃素與活化的BV2細(xì)胞共培養(yǎng),并將其分為空白組(培養(yǎng)基+MTT),對(duì)照組(細(xì)胞+
3、培養(yǎng)基+MTT)、實(shí)驗(yàn)組1(Aβ1-42+細(xì)胞+培養(yǎng)基+MTT)組、實(shí)驗(yàn)組2(Aβ1-42+姜黃素+細(xì)胞+培養(yǎng)基+MTT),應(yīng)用MTT法鑒定細(xì)胞活力,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)炎性反應(yīng)過(guò)程中IL-1β及TNF-α的分泌。
結(jié)果:-1、10umolAβ1-42預(yù)處理BV2細(xì)胞12h,可模擬阿爾茨海默病小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)過(guò)程。2、Aβ1-42+姜黃素組IL-1β,TNF-α的表達(dá)較Aβ1-42組明顯受到抑制(p<0.05)
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