miR-34-449調(diào)控哮喘氣道炎癥及與自噬相關性研究.pdf

1、第一部分:miR-34/449在哮喘患兒外周血中的表達及意義
　　目的:探討miR-34/449在支氣管哮喘急性發(fā)作期患兒外周血中的表達及其與患兒病情的相關性。
　　方法:臨床納入2015年1月至2017年1月我院收治的支氣管哮喘急性發(fā)作期患兒48例，設為哮喘組，同時納入同時期40例健康體檢兒童作為對照組。分別采集兩組外周血，并進行microRNA-34與microRNA-449水平檢測，同時檢測血嗜酸性粒細胞計數(shù)、IgE、

2、IL-5、IL-13、TNF-α、IFN-γ水平。
　　結果:哮喘組患兒microRNA-34與microRNA-449水平分別為（0.26±0.12）、（0.38±0.07），對照組患兒microRNA-34與microRNA-449水平分別為（0.98±0.19）、（1.03±0.21），差異有顯著性(P＜0.001)。哮喘患兒嗜酸性粒細胞計數(shù)、IgE、IL-5、IL-13、TNF-α、IFN-γ水平分別為(0.45±0.12

3、)×109/L、(169.47±100.58) IU/mL、(16.85±3.31)pg/mL、(57.56±20.89) pg/mL、(15.57±3.07) pg/mL、(65.69±10.31)pg/mL，對照組患兒嗜酸性粒細胞計數(shù)、IgE、IL-5、IL-13、TNF-α、IFN-γ水平分別為(0.23±0.09)×109/L、(72.47±32.58) IU/mL、(8.75±1.57) pg/mL、(8.80±9.51)pg

4、/mL、(8.12±1.50) pg/mL、(77.38±9.23)pg/mL，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　結論:支氣管哮喘急性發(fā)作期患兒外周血中microRNA-34/449水平降低，推測miR-34/449與哮喘發(fā)生發(fā)展密切相關;提高miR-34/449表達水平是否起到治療哮喘的作用值得進一步研究。
　　第二部分:表達miR-34/449對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響及與自噬的相關性
　　目的:研究表達

5、miR-34/449對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響及與自噬的相關性，為miR-34/449在哮喘治療方面的應用奠定基礎。
　　方法:18只年齡6-8周雄性BALB/c小鼠，隨機化分為哮喘模型組、正常對照組、miR34/449 mimics干預組，每組6只小鼠，以卵蛋白腹腔注射致敏及霧化吸入激發(fā)小鼠制備哮喘模型，ELISA法檢測各組小鼠支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid，BALF)中IL-5

6、、IL-6、TNF-α水平，肺組織行HE染色觀察肺部炎癥細胞浸潤情況，RT-PCR檢測肺組織miR34/449的表達情況，免疫熒光分析肺組織中TGF-β表達情況，Westemblot檢測bFGF、collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA的水平，同時檢測自噬相關蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1和P62的表達情況，了解過表達miR-34/449對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑改善的情況并探討其機制。
　　結果:哮喘模

7、型組小鼠肺組織炎癥細胞浸潤明顯，以嗜酸性粒細胞為主，BALF中IL-5、IL-6、TNF-α水平、肺組織TGF-β、bFGF、collagenⅠ、 collagenⅢ、α-SMA的水平升高，同時自噬相關蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1的表達升高。哮喘模型組小鼠肺組織miR34/449的表達低于正常組，miR34/449 mimics干預組miR34/449的表達水平較正常組及哮喘模型組明顯升高，差異有顯著性(P＜0.05)。

8、miR34/449 mimics干預組與哮喘模型組相比，小鼠肺組織炎癥細胞浸潤明顯減輕，BALF中IL-5、IL-6、TNF-α水平、肺組織TGF-β、bFGF、collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA的水平下降，同時自噬相關蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1的表達下降，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　結論:哮喘小鼠模型肺組織Mir-34/449表達水平下降，表達Mir-34/449能明顯減輕哮喘小鼠氣道周