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1、SichuanA嘶culturalUniVers時(shí)MasterDegreeDissertationLeammgexperienceinnuencetheexpressionoftheodorantbilldingproteinin&ZP加沈r,,2口臟辦甜口刀P刀s括XiaoByChenchunyanDirectedbyPro£Y抽gWeiMajorofForestProtectionCollegeofFores蚵SichuanAgri
2、culturalUhiVersit),Chengdu,61l130,Sichuan,PR。ChinaJune,2015摘要川硬皮腫腿蜂(&比m沈rm口5fc辦“口胛P淞括xiao),屬腫腿蜂科(Bethylidae)天牛腫腿蜂屬(&彪m如r肌口),是一種能寄生多種鉆蛀性害蟲的天敵昆蟲,具有重要的生物防治價(jià)值。昆蟲通過(guò)感知空氣中的揮發(fā)性氣味物質(zhì)指導(dǎo)其行為反應(yīng),這包括兩個(gè)重要方面:一是寄主植物揮發(fā)出的多種氣味物質(zhì)組成的化學(xué)圖譜,二是昆蟲具有
3、與之相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)和識(shí)別機(jī)制,只有對(duì)這兩方面都進(jìn)行了深入研究,才能更好地應(yīng)用到害蟲防治的實(shí)踐中。近年來(lái),國(guó)內(nèi)對(duì)昆蟲感受氣味物質(zhì)的行為化學(xué)模式的研究較多,但是昆蟲氣昧結(jié)合蛋白及其與氣味識(shí)別的關(guān)系研究較少,對(duì)寄生蜂的相關(guān)研究則更少。因此,我們利用Y型行為儀測(cè)試不同日齡的川硬皮腫腿蜂經(jīng)云斑天牛蟲糞木屑混合物處理后的行為反應(yīng),研究川硬皮腫腿蜂對(duì)云斑天牛蟲糞木屑揮發(fā)性氣味的學(xué)習(xí)效應(yīng);根據(jù)己報(bào)道的管氏腫腿蜂(&膪,D如M螂倒口歷Xiaoetwu)氣味
4、結(jié)合蛋白的cDNA序列設(shè)計(jì)引物,利用R1’PCR法獲得編碼川硬皮腫腿蜂兩種氣味結(jié)合蛋白的cDNA片段,并對(duì)其進(jìn)行基因克?。焕胹YBRGreenI熒光染料法,采用Real—1hePCR比較Ct值的相對(duì)定量法獲得川硬皮腫腿蜂不同部位、不同日齡經(jīng)歷及未經(jīng)歷云斑天牛蟲糞木屑的氣味結(jié)合蛋白基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜,研究其基因表達(dá)規(guī)律,初步探索川硬皮腫腿蜂學(xué)習(xí)效應(yīng)對(duì)氣味結(jié)合蛋白表達(dá)的影響,主要研究結(jié)果如下:1不同日齡川硬皮腫腿蜂對(duì)云斑天牛蟲糞木屑混合物的
5、學(xué)習(xí)效應(yīng)經(jīng)歷云斑天牛蟲糞木屑混合物氣味處理后的腫腿蜂與未經(jīng)歷氣味處理的腫腿蜂相比,前者對(duì)該氣味的選擇率均得到提高。川硬皮腫腿蜂在羽化和成蟲初期(1、2日齡)對(duì)云斑天牛蟲糞木屑混合物氣味學(xué)習(xí)效應(yīng)逐漸增強(qiáng),在羽化后第2目學(xué)習(xí)效應(yīng)最強(qiáng),而在羽化后第4~10日學(xué)習(xí)效應(yīng)減弱,在羽化后第12日學(xué)習(xí)效應(yīng)又顯著增強(qiáng)。2川硬皮腫腿蜂OBP基因克隆及序列分析根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的管氏腫腿蜂SguaOBPl和SguaOBP2基因設(shè)計(jì)引物,克隆分析了編碼川硬皮腫腿峰氣
6、味結(jié)合蛋白Ssic0BPl和Ssic—OBP2的cDNA(GenBank序列號(hào)分別為:KM924438和KM924439)。根據(jù)測(cè)序結(jié)果和結(jié)構(gòu)分析表明,川硬皮腫腿SsicOBPl基因包含1個(gè)長(zhǎng)為401bp的開放閱讀框,編碼133個(gè)氨基酸殘基;ssicOBP2基因包含1個(gè)長(zhǎng)為420bp的開放閱讀框,編碼139個(gè)氨基酸殘基。ssic一0BPl與SsicOBP2蛋白均成酸性,前者分子量約為14,4kD,后者分子量約為157kD,均含有6個(gè)保守
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