基于石墨烯量子點(diǎn)-P2Y12R復(fù)合固定相的受體色譜篩選模型的構(gòu)建及應(yīng)用.pdf

1、從中藥中篩選活性成分是創(chuàng)新藥物的重要源泉，而活血化瘀藥在血栓性疾病防治方面獨(dú)具優(yōu)勢(shì)。血栓性疾病致死率高，血小板的聚集是引發(fā)其產(chǎn)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。P2Y12受體是血小板上重要受體，具有良好的組織分布特異性及放大血小板信號(hào)的作用，已成為抗血小板聚集最重要的靶點(diǎn)。本論文建立P2Y12受體色譜模型，旨在篩選活血化瘀藥抗血小板聚集活性成分，主要分為兩部分:
　　一、通過(guò)“氧化切割”方式制備了石墨烯量子點(diǎn)(GQDs)，利用EDCI/NHS為偶聯(lián)劑

2、，以牛血清白蛋白(BSA)為工具蛋白，制備BSA/GQDs/SiO2色譜填料。采用掃描電子顯微鏡和表面能譜分析等方法對(duì)固定相進(jìn)行表征并對(duì)構(gòu)建的BSA色譜模型進(jìn)行色譜行為考察。采用直接進(jìn)樣法研究了BSA與配體沒(méi)食子酸、原兒茶醛、阿魏酸、香草酸、原兒茶酸和咖啡酸的相互作用。結(jié)果表明，BSA能夠成功固載于GQDs/SiO2色譜填料表面且具有較好的生物活性，BSA色譜模型能夠穩(wěn)定且特異性分離同母核結(jié)構(gòu)的六種配體，并且在BSA上均存在一類結(jié)合位點(diǎn)

3、。以上結(jié)果說(shuō)明GQDs/SiO2的色譜填料可有效固載蛋白質(zhì)，并可保證蛋白質(zhì)的生物活性，該方法可用于構(gòu)建生物大分子藥物篩選色譜模型。
　　二、以P2Y12受體為模型蛋白，構(gòu)建基于GQDs/SiO2色譜填料的P2Y12受體色譜，并對(duì)P2Y12受體鍵合量和保留特性等進(jìn)行考察。以此為藥物篩選模型，對(duì)丹參、丹紅注射液以及化合物丹參素異丙酯(IDHP)、丹參素冰片酯(DBZ)進(jìn)行活性篩選、富集，并采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)進(jìn)行鑒

4、定，輔以抗血小板聚集活性驗(yàn)證。結(jié)果顯示，P2Y12配體依諾格雷等在P2Y12受體色譜模型上有特異性保留;確定了丹參醇提液中與P2Y12受體具有相互作用的3個(gè)活性成分（二氫丹參酮I等）;水提液中的10個(gè)活性成分（丹參素等）;丹紅注射液中的7個(gè)活性成分（原兒茶醛等）;并發(fā)現(xiàn)DBZ和IDHP均在P2Y12受體色譜模型上有保留且能夠抑制ADP誘導(dǎo)的血小板的聚集。以上結(jié)果均表明基于GQDs/SiO2新型色譜填料構(gòu)建的P2Y12受體色譜模型可以應(yīng)用