烏靈菌粉抗抑郁及谷紅注射液抗腦缺血再灌注損傷的作用和機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 烏靈菌粉抗抑郁作用及機制研究
　　抑郁癥(Depression)又稱為抑郁障礙，是一種常見的精神障礙性疾病，其臨床表現(xiàn)有心境低落、思維遲緩、意志活動減退、認知功能損害和一些軀體癥狀，主要包括睡眠障礙、乏力、食欲減退、體重下降等。其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，改善抑郁癥的治療一直是包括精神科在內(nèi)的眾多學(xué)科的研究熱點。藥物治療是目前治療抑郁癥的主要手段，但抑郁癥是一個涉及多種機制的復(fù)雜疾病

2、，近年來抗抑郁藥物的研制雖有很大進展，但仍缺乏理想的藥物。近年來研制的新型抗抑郁藥雖然毒性低、不良反應(yīng)少，但低應(yīng)答率及長期用藥亦可能引起潛在不良反應(yīng)是面臨的主要挑戰(zhàn)。因而尚需深入研究其發(fā)病機制研究新型治療藥物。
　　烏靈參(Xylariasp)是生長在土棲白蟻巢中的一種真菌的菌核，具有利尿、補心神、治失眠、治療吐血及產(chǎn)后失血等藥用價值。烏靈菌粉是采用深層發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)烏靈參菌絲體制成的淺棕色至棕色粉末，其膠囊制劑在臨床主要用于鎮(zhèn)靜安

3、神和抗失眠的治療。烏靈菌粉的抗抑郁、抗焦慮效果在臨床上已經(jīng)得到證實，顯示中醫(yī)藥在這方面的獨特優(yōu)勢。為了進一步確立這一優(yōu)勢，仍需在作用機制方面進行深入研究。
　　本研究建立了社會競爭失敗小鼠抑郁癥模型，并通過社交回避反應(yīng)評價實驗觀察烏靈菌粉的抗抑郁作用。結(jié)果表明模型組小鼠在社交回避反應(yīng)評價實驗中的社交區(qū)停留時間比例明顯低于對照組動物(P＜0.01)，而烏靈菌粉治療（低劑量，0.5 g/kg、中劑量，1.0 g/kg、高劑量，2.0

4、g/kg）后可以顯著提高其社交區(qū)停留時間比例(P＜0.05)。同時，模型組小鼠的角落區(qū)停留時間比例明顯高于對照組動物(P＜0.01)，低、中、高劑量的烏靈菌粉治療后顯著降低了其角落區(qū)停留時間比例(P＜0.05)。隨后我們進一步在分子水平上對烏靈菌粉的抗抑郁癥作用機制進行探討。因為近來有不少研究報道社會競爭失敗壓力會增加嚙齒類動物大腦內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白的表達，于是我們采用Western blotting和qRT-PCR對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基

5、因和蛋白的表達水平進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，模型組小鼠大腦海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志性蛋白GRP78/Bip和PDI的表達水平升高(P＜0.05)，而烏靈菌粉治療14 d后其表達水平顯著降低(P＜0.05);與正常對照組相比，模型組小鼠海馬蛋白IRE1α和基因sXBP1的表達水平顯著增加(P＜0.05)，而烏靈菌粉低、中和高劑量治療14 d后其表達水平顯著降低(P＜0.05);此外模型組小鼠海馬IRE1α的蛋白和sXBP1的基因表達水平明

6、顯高于對照組(P＜0.05)，烏靈菌粉治療后其表達水平明顯降低(P＜0.05);與細胞凋亡相關(guān)的基因CHOP轉(zhuǎn)錄水平在模型組小鼠海馬內(nèi)顯著升高，而Bcl2/Bax蛋白表達水平則顯著降低(P＜0.05)，而高劑量的烏靈菌粉顯著降低其表達水平(P＜0.05)。
　　上述結(jié)果表明，烏靈菌粉能夠有效改善社會競爭失敗模型小鼠的抑郁癥狀，具有良好的抗抑郁作用。機制研究顯示，烏靈菌粉能夠有效維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)進而保護細胞，恢復(fù)神經(jīng)細胞正常功

7、能。
　　第二部分 谷紅注射液抗腦缺血再灌注損傷的作用機制研究
　　腦缺血是目前全球致死率位于第二位的腦血管疾病，缺血再灌注損傷是腦缺血重要的病理生理機制之一。研究證實腦缺血再灌損傷導(dǎo)致了線粒體廣泛性的進行性損傷，自噬是清除損傷線粒體的普遍機制，腦內(nèi)神經(jīng)元的正常生理活動依賴于線粒體產(chǎn)生的ATP作為能量供體。故線粒體的正常功能在腦缺血的多種損傷與修復(fù)階段起到重要作用。目前臨床上腦缺血治療的方案之一是聯(lián)合使用溶栓藥物與神經(jīng)保護藥

8、物。但如何減少經(jīng)溶栓處理后的再灌注損傷已經(jīng)成為一個重要問題。到目前為止，尚缺乏療效確切且能夠?qū)鼓X缺血再灌注損傷的藥物。
　　谷紅注射液是由乙酰谷酰胺和紅花提取液制成的復(fù)方制劑，紅花提取液含有紅花黃色素和紅花苷類等有效成分，其中羥基紅花黃色素A等對缺血性卒中的保護作用已被眾多基礎(chǔ)研究所證實。乙酰谷酰胺是谷胺酰胺乙?；难苌铮芯恳驯砻鞴劝滨０房梢詫鼓X缺血引起的神經(jīng)元損傷。目前已有大量的臨床應(yīng)用表明谷紅注射液對腦缺血患者具有良

9、好的療效，本實驗室的前期研究也顯示，谷紅注射液可以顯著改善實驗性腦缺血再灌注損傷大鼠的運動功能。
　　為進一步探討其具體作用機制，本實驗采用大鼠大腦中動脈栓塞(middlecerebr alartery occlusion，MCAO)模型，并通過神經(jīng)缺損癥狀評分和貼紙去除實驗對谷紅注射液的藥效學(xué)進行評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠神經(jīng)缺損癥狀評分顯著增加(P＜0.001)，雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時間顯著延長(P＜0.001)，經(jīng)過谷紅注射

10、液14 d的治療后，大鼠神經(jīng)缺損癥狀評分顯著減少且雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時間(P＜0.05)明顯縮短。然后對大鼠大腦皮層組織線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達水平進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)谷紅注射液治療14d后可有效上調(diào)Beclin1、Parkin、KIFC2和UCP3蛋白的表達(P＜0.05)。
　　綜上，本實驗觀察到谷紅注射液對大鼠腦缺血再灌注損傷有明顯的保護作用，而這一作用可能是通過對線粒體功能的保護而實現(xiàn)的。這為谷紅注射液的臨床應(yīng)用以及抗腦