紅花注射液對(duì)兔脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：觀察兔脊髓缺血再灌注損傷后紅花注射液對(duì)兔后肢功能、組織病理學(xué)、脊髓組織中Caspase-3及血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及白細(xì)胞介素-8(IL-8)改變的影響，研究紅花注射液后處理對(duì)神經(jīng)細(xì)胞壞死、凋亡及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的影響，探討紅花注射液后處理在脊髓缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，從而為今后的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注模型。24只新西蘭兔隨機(jī)分為3組

2、，每組8只，假手術(shù)組（C組），缺血再灌注組（I/R組），紅花注射液后處理組（S組）。假手術(shù)組不阻斷腹主動(dòng)脈，僅實(shí)施麻醉及手術(shù)操作。缺血再灌注組阻斷腹主動(dòng)脈40分鐘后開放灌注，紅花注射液后處理組在阻斷腹主動(dòng)脈40分鐘開放灌注后經(jīng)耳緣靜脈注射紅花注射液2.0ml/kg，隨后持續(xù)泵注至總量為5ml/kg，C組與I/P組用0.9％生理鹽水5ml/kg替代。術(shù)后各組分別于再灌注0小時(shí)、4小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)股靜脈取血，測定血清中丙二

3、醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)以及白細(xì)胞介素-8(interleukin-8，IL-8)濃度。再灌注4小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)，48小時(shí)觀察動(dòng)物后肢活動(dòng)并進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。手術(shù)各組分別于再灌注后48小時(shí)后取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)2-5段脊髓行病理學(xué)檢查，采用HE染色觀察脊髓標(biāo)本的一般病理學(xué)改變，TUNEL法染色觀察脊髓標(biāo)本的細(xì)胞凋亡情況，Western-blot檢測脊

4、髓組織中Caspase-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果：⑴I/R，S組在再灌注后均有不同程度的下肢癱瘓。S組于再灌注后各觀察時(shí)間點(diǎn)后肢神經(jīng)功能評(píng)分（改良Tarlov評(píng)分）均高于I/R組（P＜0.05，P＜0.01）。⑵組織病理學(xué)檢查（HE染色）發(fā)現(xiàn)再灌注48h后S組脊髓神經(jīng)細(xì)胞空泡變性范圍、炎癥反應(yīng)均明顯輕于I/R組，脊髓前角正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)S組均顯著高于I/R組（P＜0.05）。⑶TUNEL染色顯示凋亡神經(jīng)元計(jì)數(shù)I/R組明顯多于S組，C

5、組脊髓標(biāo)本中無凋亡細(xì)胞顯色。⑷Western-blot檢測脊髓組織中Caspase-3的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，C組無Caspase-3表達(dá)，I/R組Caspase-3表達(dá)量明顯高于I/R組。⑸Elisa法檢測血清指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，I/R組與S組比較，脊髓缺血再灌注后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血清SOD活性均較低(P＜0.05)，而MDA含量均增多(P＜0.05)。⑹Elisa法檢測脊髓缺血再灌注后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清IL-8水平發(fā)現(xiàn)，I/R組IL-8水平均顯著高于C組(P＜0.

6、05，P＜0.01)，而S組均明顯低于IR組（P＜0.05，P＜0.01）。
　　 結(jié)論：①紅花注射液后處理對(duì)脊髓缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。其保護(hù)作用主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面，一是抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，二是減少神經(jīng)元的壞死。②紅花注射液減輕脊髓缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷，機(jī)制可能與其能減輕脊髓神經(jīng)細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。③紅花注射液抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與其能夠顯著減少再灌注期間Caspase-3的表達(dá)水平有關(guān)。④紅花注射液減少神