還原型谷胱甘肽在二噁英致腭裂模型中的作用研究.pdf

1、非綜合征型唇腭裂是新生兒頜面部的主要先天性畸形，是遺傳和環(huán)境因素相互作用所致的多基因遺傳病其病因仍未完全明確。唇腭裂將直接影響患兒的進食、吞咽、語音及呼吸功能，甚至頜骨發(fā)育和心理也會受到極大影響，手術(shù)是目前治療腭裂的唯一有效方法，但術(shù)后仍可遺留不同程度的畸形，給患兒和家屬造成極大的心理創(chuàng)傷和精神負擔。因此，研究腭裂發(fā)病機制，在胎兒發(fā)育中有效預(yù)防其發(fā)生顯得尤為重要。前人為了研究唇腭裂，建立了很多穩(wěn)定的唇腭裂模型，如激素致畸模型，二惡英致畸

2、模型等。環(huán)境因素作為現(xiàn)在唇腭裂發(fā)病因素中可干預(yù)的因素顯得額外重要，環(huán)境因素中2，3，7，8-四氯二苯并二噁英(TCDD)作為現(xiàn)在研究最熱門的鹵代烴化合物是一種有毒化合物廣泛存在，主要源于塑料垃圾焚燒、電子回收、農(nóng)藥應(yīng)用及紙漿漂白。一旦暴露其中，會導(dǎo)致胚胎畸形發(fā)生、免疫抑制、致死及其他毒性反應(yīng)本實驗利用環(huán)境因素中2，3，7，8-四氯二苯并二惡英(TCDD)致胎鼠腭裂模型進行研究。
　　芳香烴受體通過特異性調(diào)節(jié)CYP1A1的表達發(fā)揮其

3、功能，CYP1A1作為一種細胞色素氧化酶廣泛表達在大多數(shù)哺乳動物幾乎所有組織中，其中CYP1A1可以酶解環(huán)境中的多環(huán)芳烴，其代謝產(chǎn)物高度致畸性。由芳香烴受體直接調(diào)節(jié)誘導(dǎo)CYP1A1產(chǎn)生的原始目的基因的轉(zhuǎn)錄，CYP1A1與其他細胞色素酶一起參與內(nèi)源性物質(zhì)或者外源性物質(zhì)的代謝而可以增加了活性氧調(diào)節(jié)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。二惡英聯(lián)合抗氧化劑比如維生素E，琥珀酸或者鞣花酸可以顯著降低其胎兒生長緩慢和胎鼠高死亡率等不良并發(fā)癥。芳香烴受體介導(dǎo)的致畸毒性是否

4、是活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激帶來的結(jié)果至今沒有明確解釋。
　　目的:
　　在二噁致腭裂模型中打破還原型谷胱甘肽的穩(wěn)態(tài)，觀察還原型谷胱甘肽穩(wěn)態(tài)的改變是否會對腭中嵴上皮細胞形態(tài)及腭裂發(fā)生率產(chǎn)生影響，探究氧化自由基在TCDD致畸過程中是否能起到主導(dǎo)作用，為腭裂的環(huán)境致畸因素提供預(yù)防的理論依據(jù)。
　　材料和方法:
　　本實驗采用SPF級C57BL/6J小鼠。將GD10天的孕鼠C57BL/6J隨機分成4組，TCDD組:腹腔注射生

5、理鹽水和四氯二苯二噁英(TCDD)灌胃;TCDD+BSO組:腹腔注射丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)和四氯二苯二噁英(TCDD)灌胃;BSO組腹腔注射丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)和玉米油灌胃;對照組:腹腔注射生理鹽水和玉米油灌胃。光學(xué)顯微鏡和電子掃描電鏡下觀察胎鼠GD13.5、GD14、GD14.25、GD14.5、GD14.75、GD15天腭胚突的發(fā)育及細胞表面形態(tài)。統(tǒng)計各組小鼠在GD17的腭裂發(fā)生率。免疫組化檢測各組腭中嵴上皮各時期CYP1

6、A1蛋白表達情況。統(tǒng)計分析檢測還原型谷胱甘肽穩(wěn)態(tài)的改變是否給二噁英腭裂模型帶來質(zhì)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、TCDD成功構(gòu)建高致畸率的腭裂模型。
　　2、丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)增加了腭裂的發(fā)生率，但是相對正常對照組并無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、TCDD組腭胚突上抬時間較對照組推遲1天，添加BSO的TCDD組腭胚突上抬過程較正常組減慢，但最后上抬的時間未變。
　　4、電鏡下胚胎發(fā)育的各發(fā)育時

7、期，腭中嵴上皮表面TCDD組與對照組有明顯差異。TCDD組CYP1A1表達明顯增多。
　　5、TCDD組腭中嵴上皮可見CYP1A1的高表達，正常組腭中嵴上皮融合過程中可見CYP1A1的表達。
　　結(jié)論:
　　低劑量的TCDD可誘導(dǎo)腭裂的發(fā)生。TCDD致腭裂模型中，CYP1A1的高表達意味著在此過程中存在大量的氧化應(yīng)激反應(yīng)，相對于正常組的低表達或不表達，TCDD組中腭裂的發(fā)生發(fā)展與CYP1A1存在聯(lián)系;人為消耗還原型谷胱