鐵棒錘生物堿部位化學(xué)成分研究及其抗腫瘤活性的初步篩選.pdf

1、目的：通過陽離子交換樹脂將鐵棒錘70％乙醇提取物分為生物堿和非生物堿部位，對體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)確定鐵棒錘的活性部位，對其活性部位進(jìn)行化學(xué)成分分離與鑒定，對分離出的單體化合物進(jìn)行體外抗腫瘤的活性篩選，為尋找抗腫瘤藥物的先導(dǎo)化合物奠定基礎(chǔ)，同時為該藥材新應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　1.將伏毛鐵棒錘的干燥塊根用70%乙醇微波回流提取，回收溶劑得浸膏，將浸膏加乙醇溶液稀釋，鹽酸酸化，保留酸水層，經(jīng)732型陽離子交換樹脂，得生

2、物堿部位和非生物堿部位。
　　2.采用MTT法測定鐵棒錘各部位對人胃癌SGC-7901，肝癌HepG2，肺癌A549細(xì)胞生長的抑制作用，選取抗腫瘤最強(qiáng)的部位即活性部位做進(jìn)一步研究。
　　3.將抗腫瘤活性最強(qiáng)部位通過硅膠柱色譜，ODS反相柱色譜，凝膠柱色譜，薄層層析色譜等多種分離手段進(jìn)行單體化合物分離，利用1H-NMR,13C-NMR等波譜技術(shù)對單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　4.采用MTT法測定鐵棒錘各單體化合物對人胃癌

3、SGC-7901，肝癌HepG2，肺癌A549細(xì)胞生長的抑制作用，篩選出具有抗腫瘤活性的單體化合物。
　　結(jié)果：
　　1.從10kg伏毛鐵棒錘粗粉中提取，得到0.8kg浸膏。通過732型陽離子交換樹脂分離，得到非生物堿部位33g，生物堿部位30.5g。
　　2.采用MTT法對人胃癌SGC-7901結(jié)果顯示鐵棒錘總提取物及生物堿部位及非生物堿部位的IC50值分別為125.83μg/ml、27.92μg/ml和421.42

4、μg/ml；鐵棒錘乙醇提取、生物堿部位和非生物堿部位對肝癌HepG2細(xì)胞的IC50值分別為26.18μg/ml、15.22μg/ml和745.91μg/ml；鐵棒錘乙醇提取物及生物堿部位及非生物堿部位對肺癌A549細(xì)胞的IC50值分別為386.3μg/ml、37.16μg/ml和433.24μg/ml。
　　3.對伏毛鐵棒錘生物堿部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，從中分離得到6個化合物，分別鑒定為4-(2-formyl-5-hydroxy m

5、ethylpyrrol-1-yl) butyric acid（Ⅰ）、尼奧靈neoline(Ⅱ)、14-O-乙酰新烏寧堿14-O-acetylneoline（Ⅲ）、宋果靈songorine（Ⅳ）、12-表-歐烏堿12-epi-napelline（Ⅴ）、12-表-脫氫歐烏堿12-epi-dehydronapelline（Ⅵ)。
　　4.對分離出來的單體化合物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選，研究結(jié)果顯示：尼奧靈neolin e(Ⅱ)抑制SGC-7

6、901、HepG2和A549細(xì)胞增殖的IC50值分別為16.43μg/ml、12.41μg/ml和15.20μg/ml；14-O-乙酰新烏寧堿14-O-acetylneoline（Ⅲ）抑制SGC-7901、HepG2和A549細(xì)胞增殖的IC50值分別為8.13μg/ml、16.17μg/ml和8.98μg/ml；宋果靈songorine（Ⅳ）抑制SGC-7901、HepG2和A549細(xì)胞增殖的IC50值分別為16.64g/ml、31.3

7、6μg/ml和22.13μg/ml；12-表-歐烏堿12-epi-napelline（Ⅴ）抑制SGC-7901、HepG2和A549細(xì)胞增殖的IC50值分別為23.26μg/ml、34.82μg/ml和23.66μg/ml；12-表-脫氫歐烏堿12-epi-dehyd ro nape llin e（Ⅵ)抑制SGC-7901、HepG2和A549細(xì)胞增殖的IC50值分別為23.24μg/ml、16.67μg/ml和27.12μg/ml。<

8、br>　　結(jié)論：
　　1.通過對鐵棒錘的提取和富集，得到了生物堿部位和非生物堿部位。
　　2.通過體外抗腫瘤活性篩選，鐵棒錘各部位的體外抗腫瘤作用強(qiáng)弱依次為生物堿部位>總提物>非生物堿部位，生物堿部位是鐵棒錘中主要的抗腫瘤活性部位。
　　3.對伏毛鐵棒錘乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)的分離，共得到6個單體化合物分別是4-(2-for myl-5-hydroxy methylpyrrol-1-yl) butyric acid（Ⅰ）、

9、尼奧靈neoline(Ⅱ)、14-O-乙酰新烏寧堿14-O-acetylneoline（Ⅲ）、宋果靈songorine（Ⅳ）、12-表-歐烏堿12-epi-napelline（Ⅴ）、12-表-脫氫歐烏堿12-epi-dehydronapelline（Ⅵ)，其中化合物4-(2-formyl-5-hydroxy methy lpyrrol-1-yl) butyric acid（Ⅰ）和14-O-乙酰新烏寧堿14-O-acetylneoline