簇生沿絲傘化學(xué)成分及其抗腫瘤活性的研究.pdf

1、本論文對(duì)簇生沿絲傘(Naematolomafasciculare)的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，并應(yīng)用抗腫瘤體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)分離得到的各個(gè)組分和各個(gè)單體成分進(jìn)行了抗腫瘤活性的研究。 簇生沿絲傘子實(shí)體干燥后，甲醇60℃熱提取3次，提取液濃縮后加水成混懸液，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，水層蒸干后溶于甲醇，不溶部分再次溶于水，即將初提物分為石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層和水層四個(gè)組分。石油醚層上硅膠柱，用正己烷∶乙酸乙酯(6∶5)溶劑系統(tǒng)

2、洗脫，得化合物1和化合物4。乙酸乙酯層濃縮后低溫放置24小時(shí)，析出白色沉淀。沉淀經(jīng)甲醇和乙醚反復(fù)純化得化合物2。溶液部分上硅膠柱，用正己烷∶乙酸乙酯(6∶5)溶劑系統(tǒng)洗脫，得到16個(gè)部分，部分3中得到化合物4。部分4再次上硅膠柱，用乙酸乙酯(100﹪)洗脫，得化合物3。甲醇層濃縮至小體積放入冰箱靜置，析出結(jié)晶，經(jīng)水和乙醇反復(fù)重結(jié)晶得化合物5?；衔?-5經(jīng)過(guò)理化檢識(shí)、HPLC分析、核磁共振和質(zhì)譜等色譜檢測(cè)分別鑒定為麥角甾醇過(guò)氧化物、fa

3、sciculolC、啤酒甾醇、麥角甾醇和甘露醇。 采用傳統(tǒng)的多糖提取方法(水提醇沉)，對(duì)簇生沿絲傘子實(shí)體的粗多糖進(jìn)行提取，然后進(jìn)行去蛋白。結(jié)果表明，多糖成分的含量較高，得率可達(dá)3.6﹪。 對(duì)簇生沿絲傘的石油醚層進(jìn)行GC-MS分析，分離并分別鑒定為十八碳二烯酸和十六碳酸等20個(gè)化合物。其中多數(shù)為飽和烷烴，還含有少量的不飽和脂肪酸和脂肪酸酯。 應(yīng)用MTT法，檢測(cè)簇生沿絲傘的石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層、水層、粗多糖和

4、單體化合物fasciculolC對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果表明，石油醚層可顯著抑制MCF-7的細(xì)胞增殖，且存在量效關(guān)系，藥物濃度為2mg/mL時(shí)，抑制率達(dá)60﹪。其次，fasciculolC對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖也具有抑制作用，且存在量效關(guān)系，抑制率達(dá)35.4﹪。而且，這兩個(gè)組分與對(duì)照組對(duì)比，都具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。然而，乙酸乙酯層、甲醇層、水層和粗多糖成分對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用不明顯，但高劑量組與對(duì)照組

5、對(duì)比同樣具有顯著性差異(p＜0.01或p＜0.05)，說(shuō)明都對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)存在不同程度的影響。 選用H22荷瘤小鼠，對(duì)簇生沿絲傘的石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層、水層、粗多糖和各個(gè)單體化合物進(jìn)行抗腫瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，石油醚層和甲醇層對(duì)H22荷瘤鼠具有明顯的抑瘤作用。石油醚層(430mg/kg)抑瘤率可達(dá)64.42﹪，且具有一定的量效關(guān)系，并和對(duì)照組對(duì)比具有顯著差異(p＜0.05)，且對(duì)小鼠免疫器官無(wú)明顯影響。甲醇層(1000mg

6、/kg)抑瘤率可達(dá)64.47﹪，但差異性不顯著，對(duì)小鼠體重的增加略有影響，但對(duì)胸腺和脾臟無(wú)明顯影響。乙酸乙酯層(600mg/kg)對(duì)H22荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用不明顯，抑瘤率為26.60﹪，該組分對(duì)胸腺和脾臟的增重?zé)o太大影響，但脾臟發(fā)黑，說(shuō)明其對(duì)免疫系統(tǒng)有負(fù)面作用。而水層對(duì)H22荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。粗多糖成分對(duì)H22荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)具有較高的抑制作用，但不存在量效關(guān)系。藥物劑量在1000mg/kg時(shí)，抑瘤率可達(dá)33.79﹪。

7、該成分可明顯增加H22荷瘤小鼠免疫器官的指數(shù)。與對(duì)照組和5-FU組對(duì)比，均具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。簇生沿絲傘中分離得到的麥角甾醇過(guò)氧化物、fasciculolC和麥角甾醇對(duì)H22荷瘤鼠均具有抑瘤作用。麥角甾醇過(guò)氧化物(50mg/kg)和麥角甾醇(50mg/kg)對(duì)H22荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，抑瘤率分別為57.45﹪和63.83﹪，且與對(duì)照組對(duì)比，均具有顯著性差異(p＜0.05)。fasciculolC(100

8、mg/kg)對(duì)H22荷瘤鼠的抑瘤率為39.13﹪，但差異不顯著。此外，三個(gè)化合物對(duì)H22荷瘤小鼠免疫器官均不存在負(fù)面影響，和5-FU組對(duì)比，具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。 總之，簇生沿絲傘的各個(gè)組分和各個(gè)單體化合物中，石油醚層、甲醇層、粗多糖、麥角甾醇、麥角甾醇過(guò)氧化物和fasciculolC都具有較好的抗腫瘤活性。尤其是體內(nèi)對(duì)H22荷瘤鼠抑瘤率可達(dá)到64.42﹪的石油醚組分具有非常高的應(yīng)用價(jià)值，主要含有麥角甾醇和麥角甾

9、醇過(guò)氧化物兩個(gè)活性成分，而且含有大量的烷烴和脂肪酸類(lèi)物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體對(duì)該藥物的吸收，尤其是其中含有的十八碳二烯酸、十六碳酸和十八碳一烯酸是臨床抗腫瘤藥康萊特注射液的主要成分，GC-MS檢測(cè)其總含量約占80﹪。首次對(duì)簇生沿絲傘的化學(xué)成分及其抗腫瘤活性進(jìn)行研究，且是國(guó)際上首次對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行體內(nèi)研究，分離并鑒定了麥角甾醇、麥角甾醇過(guò)氧化物、啤酒甾醇、fasciculolC、甘露醇、十八碳二烯酸和十六碳酸7個(gè)單體化合物，其中十八碳二烯酸和十六