簇生沿絲傘化學成分及其抗腫瘤活性的研究.pdf

1、本論文對簇生沿絲傘(Naematolomafasciculare)的化學成分進行了系統(tǒng)的研究，并應用抗腫瘤體外及體內實驗對分離得到的各個組分和各個單體成分進行了抗腫瘤活性的研究。 簇生沿絲傘子實體干燥后，甲醇60℃熱提取3次，提取液濃縮后加水成混懸液，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，水層蒸干后溶于甲醇，不溶部分再次溶于水，即將初提物分為石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層和水層四個組分。石油醚層上硅膠柱，用正己烷∶乙酸乙酯(6∶5)溶劑系統(tǒng)

2、洗脫，得化合物1和化合物4。乙酸乙酯層濃縮后低溫放置24小時，析出白色沉淀。沉淀經甲醇和乙醚反復純化得化合物2。溶液部分上硅膠柱，用正己烷∶乙酸乙酯(6∶5)溶劑系統(tǒng)洗脫，得到16個部分，部分3中得到化合物4。部分4再次上硅膠柱，用乙酸乙酯(100﹪)洗脫，得化合物3。甲醇層濃縮至小體積放入冰箱靜置，析出結晶，經水和乙醇反復重結晶得化合物5?；衔?-5經過理化檢識、HPLC分析、核磁共振和質譜等色譜檢測分別鑒定為麥角甾醇過氧化物、fa

3、sciculolC、啤酒甾醇、麥角甾醇和甘露醇。 采用傳統(tǒng)的多糖提取方法(水提醇沉)，對簇生沿絲傘子實體的粗多糖進行提取，然后進行去蛋白。結果表明，多糖成分的含量較高，得率可達3.6﹪。 對簇生沿絲傘的石油醚層進行GC-MS分析，分離并分別鑒定為十八碳二烯酸和十六碳酸等20個化合物。其中多數為飽和烷烴，還含有少量的不飽和脂肪酸和脂肪酸酯。 應用MTT法，檢測簇生沿絲傘的石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層、水層、粗多糖和

4、單體化合物fasciculolC對MCF-7細胞增殖的抑制作用。結果表明，石油醚層可顯著抑制MCF-7的細胞增殖，且存在量效關系，藥物濃度為2mg/mL時，抑制率達60﹪。其次，fasciculolC對MCF-7細胞增殖也具有抑制作用，且存在量效關系，抑制率達35.4﹪。而且，這兩個組分與對照組對比，都具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。然而，乙酸乙酯層、甲醇層、水層和粗多糖成分對MCF-7細胞增殖的抑制作用不明顯，但高劑量組與對照組

5、對比同樣具有顯著性差異(p＜0.01或p＜0.05)，說明都對細胞的生長存在不同程度的影響。 選用H22荷瘤小鼠，對簇生沿絲傘的石油醚層、乙酸乙酯層、甲醇層、水層、粗多糖和各個單體化合物進行抗腫瘤體內實驗。結果表明，石油醚層和甲醇層對H22荷瘤鼠具有明顯的抑瘤作用。石油醚層(430mg/kg)抑瘤率可達64.42﹪，且具有一定的量效關系，并和對照組對比具有顯著差異(p＜0.05)，且對小鼠免疫器官無明顯影響。甲醇層(1000mg

6、/kg)抑瘤率可達64.47﹪，但差異性不顯著，對小鼠體重的增加略有影響，但對胸腺和脾臟無明顯影響。乙酸乙酯層(600mg/kg)對H22荷瘤鼠的腫瘤生長的抑制作用不明顯，抑瘤率為26.60﹪，該組分對胸腺和脾臟的增重無太大影響，但脾臟發(fā)黑，說明其對免疫系統(tǒng)有負面作用。而水層對H22荷瘤鼠的腫瘤生長無抑制作用。粗多糖成分對H22荷瘤鼠的腫瘤生長具有較高的抑制作用，但不存在量效關系。藥物劑量在1000mg/kg時，抑瘤率可達33.79﹪。

7、該成分可明顯增加H22荷瘤小鼠免疫器官的指數。與對照組和5-FU組對比，均具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。簇生沿絲傘中分離得到的麥角甾醇過氧化物、fasciculolC和麥角甾醇對H22荷瘤鼠均具有抑瘤作用。麥角甾醇過氧化物(50mg/kg)和麥角甾醇(50mg/kg)對H22荷瘤鼠的腫瘤生長具有明顯的抑制作用，抑瘤率分別為57.45﹪和63.83﹪，且與對照組對比，均具有顯著性差異(p＜0.05)。fasciculolC(100

8、mg/kg)對H22荷瘤鼠的抑瘤率為39.13﹪，但差異不顯著。此外，三個化合物對H22荷瘤小鼠免疫器官均不存在負面影響，和5-FU組對比，具有非常顯著的差異性(p＜0.01)。 總之，簇生沿絲傘的各個組分和各個單體化合物中，石油醚層、甲醇層、粗多糖、麥角甾醇、麥角甾醇過氧化物和fasciculolC都具有較好的抗腫瘤活性。尤其是體內對H22荷瘤鼠抑瘤率可達到64.42﹪的石油醚組分具有非常高的應用價值，主要含有麥角甾醇和麥角甾

9、醇過氧化物兩個活性成分，而且含有大量的烷烴和脂肪酸類物質，促進機體對該藥物的吸收，尤其是其中含有的十八碳二烯酸、十六碳酸和十八碳一烯酸是臨床抗腫瘤藥康萊特注射液的主要成分，GC-MS檢測其總含量約占80﹪。首次對簇生沿絲傘的化學成分及其抗腫瘤活性進行研究，且是國際上首次對其抗腫瘤活性進行體內研究，分離并鑒定了麥角甾醇、麥角甾醇過氧化物、啤酒甾醇、fasciculolC、甘露醇、十八碳二烯酸和十六碳酸7個單體化合物，其中十八碳二烯酸和十六