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文檔簡介
1、本論文對桔黃裸傘[Gymnopilus spectabilis(fr) sing.]的生物學(xué)特性、化學(xué)成分及體內(nèi)抗腫瘤等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 生物學(xué)特性方面,運(yùn)用石蠟切片法對桔黃裸傘子實體的菌褶、菌蓋、菌柄縱切面、菌柄橫切面、擔(dān)孢子等進(jìn)行了顯微觀察。桔黃裸傘子實體菌絲隔膜有鎖狀聯(lián)合,菌肉菌絲無色,子實層中無囊狀體;擔(dān)子近棒狀,具有4小梗并在基部具有鎖狀聯(lián)合;擔(dān)孢子橢圓形,金黃色至黃褐色,壁厚,具有疣狀凸起。并對其石油醚層、乙酸乙
2、酯層、乙醚層、氯仿層和甲醇層樣品成分進(jìn)行了系統(tǒng)的理化鑒識。結(jié)果表明:桔黃裸傘子實體中含有甾醇、香豆素、含氧雜環(huán)及蒽醌類、有機(jī)酸、揮發(fā)油等也含有少量的生物堿。采用組織分離法,進(jìn)行了菌種分離,并進(jìn)行了栽培研究。結(jié)果表明:在改良PDA的液體培養(yǎng)基中,24℃、180r/min條件下培養(yǎng)10d后長出白色菌絲,生長的最適溫度為21~27℃;篩選出了最佳的栽培的培養(yǎng)料為:松楊木木屑(松樹、楊樹木屑各半)83%,麥麩15%,石灰1%,石膏粉1%,含水量
3、65%,pH自然,生物效率為58.7%。運(yùn)用分子生物學(xué)方法對栽培的和野生的桔黃裸傘子實體進(jìn)行了基因的鑒定。結(jié)果為栽培子實體的DNA序列和野生的子實體的DNA序列對比,同源性為97%。證明組織分離得到的菌種穩(wěn)定可靠,是桔黃裸傘的純菌種。 化學(xué)成分方面,石油醚層上硅膠柱,石油醚:乙酸乙酯(95:5)溶劑系統(tǒng)洗脫,得到組分A,并對其進(jìn)行了GC-MS研究。乙醚層濃縮后放冰箱24小時,有棕紅色的油狀物析出。上清液冰箱放置,白色針狀結(jié)晶析出
4、,反復(fù)重結(jié)晶純化得到化合物1;上清液揮干后上硅膠柱,石油醚:乙酸乙酯(8:2)溶劑系統(tǒng)洗脫,得到化合物2和3;棕紅色油狀析出物,上硅膠柱,以二氯甲烷:丙酮:甲酸(99:1:0.1)溶劑系統(tǒng)洗脫,得到紅色柱狀結(jié)晶,繼續(xù)上硅膠純化得到化合物4;甲醇層濃縮至小體積放入冰箱靜置,析出結(jié)晶,經(jīng)水和乙醇反復(fù)重結(jié)晶得到化合物5;水層用乙醇按(1:1)進(jìn)行醇沉除去多糖、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì),然后上D101大孔樹脂,分別用10%、20%、40%、80%、1
5、00%乙醇系統(tǒng)洗脫。其中10%組分進(jìn)一步用HPLC,采用C18反相半制備色譜柱,流動相用乙睛:水(9:1),2mL/min,柱溫35℃,UV295nm的條件進(jìn)行分離得到化合物6??偣驳玫?個化合物,并運(yùn)用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT-135等手段進(jìn)行了鑒定。分別為:麥角甾醇、麥角甾醇過氧化物、甘露醇、Gymnetin、α-(2-甲基丁基)-環(huán)氧戊烷、8-甲基-5,7-二烯-1,2,3,5,6-壬五醇、十八碳二
6、烯酸和十六碳酸。其中8-甲基-5,7-二烯-1,2,3,5,6-壬五醇為新的化合物,甘露醇和α-(2-甲基丁基)-環(huán)氧戊烷、十八碳二烯酸和十六碳酸為首次從桔黃裸傘分離得到。 抗腫瘤活性方面,選用H22荷瘤小鼠,對桔黃裸傘的乙酸乙酯層、乙醇層、水層和菌絲發(fā)酵物進(jìn)行抗腫瘤體內(nèi)實驗。結(jié)果表明,菌絲發(fā)酵物具有明顯的抑瘤作用,且具有量效關(guān)系。500mg/kg時抑瘤率為27.3%,1000mg/kg時抑瘤率可達(dá)41.8%;劑量在1000mg
7、/kg時與陰性組對比具有顯著差異(p<0.05),且對小鼠免疫器官無明顯影響:乙酸乙酯層劑量為600mg/kg和300mg/kg時,抑瘤率分別為41.8%和23.6%,和對照組具有顯著差異(p<0.05),且具有一定的量效關(guān)系,但600mg/kg時對小鼠的免疫系統(tǒng)有負(fù)面影響;乙醇層當(dāng)劑量為500mg/kg和1000mg/kg時,抑瘤率分別為21.8%和1.2%,抑制效果不是十分明顯。水層劑量為500mg/kg和1000mg/kg時,抑瘤
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