龍須草染色體數目變異及rDNA在染色體上的定位.pdf

1、龍須草(Eulalioposis binata)為禾本科中的一種四倍體無融合生殖植物,形成無孢子生殖的非減數胚囊,胚和胚乳不經受精自主發(fā)生,產生與母本基因型一致的后代,在作物雜種優(yōu)勢利用中具有潛在價值。已鑒定的幾種龍須草居群的無融合生殖程度在95％以上,因此尋找龍須草中有性生殖居群或單株,是研究龍須草無融合生殖遺傳調控機制的基礎。有證據表明無融合生殖物種中高倍性進行無融合生殖,低倍性進行有性生殖,因此本研究通過根尖壓片技術對來自河南、湖

2、北、湖南、廣東、廣西等5個省12個自然分布區(qū)的龍須草進行染色體計數和染色體倍性的研究,以尋找低倍性龍須草居群或單株；在龍須草根尖壓片過程中對前處理的方法進行了摸索,以確定適合于龍須草根尖壓片的處理方式。同時我們還利用熒光原位雜交技術對45S rDNA和5S rDNA在龍須草根尖細胞中期染色體上的定位進行了研究,初步建立了龍須草染色體熒光原位雜交技術體系。主要結果如下:
　　 1對龍須草根尖壓片的前處理條件進行了優(yōu)化。在本研究中以

3、對二氯苯為前處理藥物,通過設置不同的溫度和時間組合處理龍須草根尖。在對二氯苯前處理溫度為4℃、處理時間為8h的條件下,可以得到分散良好、無粘連的染色體標本。這一優(yōu)化后的處理方式在大量的龍須草染色體標本制作中取得了良好的效果。
　　 2對來自衡陽、西峽、星子、隕西、洋縣等12個居群的龍須草進行染色體計數。每個居群觀察的根尖數目都在30個以上,每個根尖觀察5個以上染色體分散良好的細胞并計數。12個居群的龍須草根尖中,絕大部分根尖的染

4、色體數目為40,其所占的比率從87.87％到97.56％不等。因此可以確定這12個居群的龍須草的根尖細胞染色體數目為40。根據龍須草的染色體基數(x=10),可以得出這12個居群的龍須草都為四倍體。在供試的12個居群中都觀察到染色體數目變異的根尖,其所占的比率在15％以內。在西峽居群中有3個根尖細胞的染色體數目為20,在隕縣居群中有4個根尖細胞的染色體數目為30,在另外5個居群中分別有1個根尖細胞的染色體數目為20或30。而且在衡陽等8

5、個居群中觀察到1-3個根尖細胞的染色體為非整倍體。以上結果表明雖然龍須草居群之間染色體數目沒有差異,但居群內不同個體的染色體數目存在一定程度的自然變異。
　　 3以攜帶45S rDNA和5S rDNA序列的質粒作為探針,在龍須草根尖細胞的中期染色體上進行了熒光原位雜交。45S rDNA在龍須草有絲分裂中期染色體上檢測到了兩對信號。其中一對信號分別位于染色體的隨體部位,且信號的大小不一。另一對信號位于染色體的近著絲粒處,而且這一對