白及地上部分抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：提取分離白及地上部分，對醇提取物進(jìn)行化學(xué)成分分析，并對該有效部分進(jìn)行抗腫瘤活性研究，探討其體內(nèi)外抗腫瘤相關(guān)作用機(jī)制，為白及的綜合利用開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：(1)分別采用乙醇回流提取和水提醇沉得到白及地上莖和葉提取物，并對提取物采用HPLC進(jìn)行化學(xué)成分分析。(2)采用MTS法檢測白及地上部分醇提物對肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞抑制作用。(3)通過Hoechst-PI染色法分析白及地上部分醇提物對A549細(xì)胞凋亡的影響。(4)

2、通過二維水平細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)研究白及地上部分醇提物對A549細(xì)胞的抑制作用。(5)采用RT-PCR技術(shù)檢測Bcl-2、Bax及ICAM-1的表達(dá)情況。(6)通過建立H22荷瘤小鼠模型，研究白及地上部分醇提物體內(nèi)抗肝癌的作用，并觀察小鼠的生長狀況以及機(jī)體的免疫功能;采用免疫組化技術(shù)分析腫瘤組織中Bax和Survivin蛋白的表達(dá)，并檢測Bcl-2和Bax基因mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)白及地上部分與白及塊莖相比較，小分子含量比多糖

3、的含量高，白及醇提物（小分子）中主要化學(xué)成分有菲類、二氫菲類等化合物。(2)白及地上部分提取物的抗腫瘤有效部分為醇提物（白及莖和葉醇提物混合作為醇提物有效部位）。(3)不同濃度的白及地上部分醇提物對肺腺癌細(xì)胞A549分別處理24h、48h和72h，發(fā)現(xiàn)白及地上部分醇提物能夠明顯降低A549的存活率，且存在劑量依賴關(guān)系。(4)Hoechst-PI染色法發(fā)現(xiàn)，40μg/ml白及地上部分醇提物作用A549時(shí)，Hoechst染色后觀察到細(xì)胞大量

4、凋亡，細(xì)胞的形態(tài)也發(fā)生改變，細(xì)胞核區(qū)域變小;50μg/ml時(shí)，細(xì)胞開始大量死亡，PI染色后可見強(qiáng)紅色的熒光。(5)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測出白及地上部分醇提物可以抑制肺腺癌細(xì)胞在平面的轉(zhuǎn)移。(6)白及地上部分醇提物促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的凋亡主要是通過抑制抗凋亡基因Bcl-2，促進(jìn)促凋亡基因Bax的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)，它還能抑制ICAM-1基因來減少肺腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。(7)白及地上部分醇提物能顯著抑制H22荷瘤小鼠腫瘤的生長;并且能夠調(diào)節(jié)小鼠機(jī)體生理狀況，改善

5、生存質(zhì)量，提高對機(jī)體的免疫功能，而且對肝臟和腎臟的毒性作用小。(8)白及地上部分醇提物能使H22荷瘤小鼠腫瘤組織中Bax蛋白表達(dá)增加，Survivin蛋白表達(dá)下降，且中劑量作用顯著;并且也能夠通過抑制抗凋亡基因Bcl-2，促進(jìn)促凋亡基因Bax的表達(dá)來誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡從而實(shí)現(xiàn)抗腫瘤。
　　結(jié)論：白及地上部分醇提物主要含有菲類、二氫菲類等化合物，對肺腺癌細(xì)胞A549有顯著的抑制作用，且存在劑量依賴關(guān)系;并且主要是通過抑制抗凋亡基因Bc