基于可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列的痰液結(jié)核分枝桿菌檢測方法建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：傳統(tǒng)的核酸擴增（NAA）技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌(MTB)，因其簡單快捷、靈敏度高被臨床上大量使用，但該技術(shù)檢測結(jié)果假陽性率高的缺陷，是其應(yīng)用于結(jié)核病臨床檢驗診斷的重大挑戰(zhàn)。本研究首次利用結(jié)核分枝桿菌散在分布單元----數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)基因序列（mycobacterial interspersed repetitive unit–variable number of tandem repeat，MIRU-VNTR）的分布特點，采用PC

2、R技術(shù)直接對痰液樣本進行基因擴增，以檢測痰液標本MTB并進行相關(guān)質(zhì)量控制，通過特異度、靈敏度等指標的臨床性能評價，為該方法在臨床的進一步推廣應(yīng)用奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法：根據(jù)擴增條件及臨床檢測實際需要，優(yōu)化選擇VNTR位點MTUB21， MTUB04，QUB-18， QUB-26， QUB-11b， MIRU31， MIRU10和MIRU26作為檢測靶標，建立可直接用于臨床痰液標本檢測的方法，收集130例肺MTB患者和200例非結(jié)

3、核患者（其它肺部疾?。┑呐R床痰液樣本，分別用MIRU-VNTR法和熒光定量 PCR（FQ-PCR）法對上述樣本進行檢測，兩種檢測方法結(jié)果與羅氏培養(yǎng)法、臨床診斷進行比較分析。
　　結(jié)果：以羅氏培養(yǎng)法為金標準時， MIRU-VNTR法的靈敏度為93.1％（108/116），特異度為97.7%（209/214），F(xiàn)Q-PCR法的靈敏度為94.0%（109/116），特異度為96.7%（207/214），MIRU-VNTR法和FQ-PCR

4、法檢測結(jié)果無統(tǒng)計學差異（χ2=0.352，P=0.569﹥0.05）。以臨床診斷為金標準時， MIRU-VNTR法的靈敏度為86.9%（113/130），特異度為100%（200/200）, FQ-PCR法的靈敏度為87.7%（114/130），特異度為99.0%（198/200），MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測結(jié)果無統(tǒng)計學差異（χ2=0.030， P=0.862﹥0.05），但MIRU-VNTR法未發(fā)現(xiàn)假陽性結(jié)果。在MIRU

5、-VNTR法檢測為陽性的結(jié)果中，98.2%（111/113）的樣本分子編碼互不相同，只有1.8%（2/113）分子編碼一致（皆為5-4-6-8-5-5-3-8），對此2例編碼一致的樣本，經(jīng)過重復(fù)檢測，結(jié)果表明此2例病人的確攜帶MTB，并非由于交叉污染所致。
　　結(jié)論：與傳統(tǒng)FQ-PCR方法比較，MIRU-VNTR檢測方法靈敏度、特異度均無顯著差異，MIRU-VNTR法的優(yōu)勢在于，通過賦予每例樣本特定的指紋信息，使不同樣本的陽性結(jié)果