免疫促凋亡scFv-Fdt-tBid基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞的雙靶向治療前列腺癌的研究.pdf

1、當(dāng)前，在世界范圍內(nèi)前列腺癌發(fā)病率已躍居男性所有惡性腫瘤的第二位，且其在發(fā)展中國(guó)家中的發(fā)病率越來(lái)越高。目前雖然對(duì)前列腺癌有多種治療方法，但是對(duì)于轉(zhuǎn)移性及去勢(shì)抵抗性的前列腺癌目前仍然沒(méi)有有效的治療措施。本實(shí)驗(yàn)組著眼于前列腺癌靶向治療策略的建立，曾成功構(gòu)建了抗前列腺特異性抗原（prostate specific antigen PSA）的特異性單克隆抗體的單鏈抗體基因。在此基礎(chǔ)上我們此次成功構(gòu)建了免疫源性低、滲透性強(qiáng)的PSA靶向重組免疫殺傷分

2、子scF v-Fdt-tBid，該分子由三部分構(gòu)成，分別為特異性針對(duì)PSA的單鏈抗體scF v基因、白喉外毒素膜轉(zhuǎn)位功能肽Fdt編碼序列及凋亡誘導(dǎo)片段截短型Bid基因tBid序列。
　　然而，如果單純的將重組分子導(dǎo)入機(jī)體內(nèi)會(huì)存在許多問(wèn)題影響重組靶向分子的作用效果如：重組分子需經(jīng)過(guò)血液循環(huán)后才能聚集于腫瘤局部，作用距離長(zhǎng)容易被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除外還難以在腫瘤局部保證靶向殺傷分子的作用濃度，此外實(shí)體瘤內(nèi)壓力大導(dǎo)致重組分子難以進(jìn)入腫瘤內(nèi)部

3、亦影響其作用效果。
　　間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell MSC）是一種在大量人體組織中存在的成體干細(xì)胞，由于其特異性的腫瘤趨向性、自體移植的可行性及基因修飾的穩(wěn)定性使其成為了一種絕佳的介導(dǎo)基因治療的細(xì)胞載體。同時(shí)他們?nèi)〔娜菀住Ⅲw外擴(kuò)增迅速及旁分泌能力強(qiáng)大同樣顯示著其作為細(xì)胞載體遞送免疫促凋亡分子的潛能。因此，我們?cè)O(shè)想利用MSC作為細(xì)胞載體，用重組基因scFv-Fdt-tBid對(duì)其進(jìn)行修飾，通過(guò)尾靜脈注射的

4、方式使其進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，趨向富集于腫瘤組織局部并持續(xù)分泌表達(dá)scFv-Fdt-tBid，從而在腫瘤局部建立高濃度、近距離、長(zhǎng)時(shí)程靶向結(jié)合殺死PSA陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞的雙重靶向治療模式。
　　體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，scF v-Fdt-tBid能在MSC細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)并分泌，并能有效下調(diào)PSA陽(yáng)性的LNCaP細(xì)胞、C4-2細(xì)胞、22RV1前列腺癌細(xì)胞的存活率。重組分子的表達(dá)對(duì)于MSC的增殖能力、分化能力等無(wú)明顯影響。在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，MSC.s

5、cFv-Fdt-tBid能有效地、特異地誘導(dǎo)PS A陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞凋亡。在腫瘤趨向性檢測(cè)中，體外Transwell實(shí)驗(yàn)顯示前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清能有效地誘導(dǎo)MSC. scFv-Fdt-tBid的遷移。
　　在體內(nèi)試驗(yàn)中，小動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)顯示MSC. scFv-Fdt-tBid-LUC細(xì)胞通過(guò)尾靜脈注射后能有效趨向于腫瘤部位并大量聚集，且間接免疫熒光染色顯示在肝、心、脾、肺、腎組織內(nèi)很少檢測(cè)到重組分子表達(dá)，而在腫瘤部位重組分子高表達(dá)。

6、體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MSC. scFv-Fdt-tBid能明顯抑制22RV1皮下腫瘤的生長(zhǎng)，且腫瘤組織中檢測(cè)到明顯的凋亡發(fā)生，而通過(guò)對(duì)血液相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)及內(nèi)臟組織HE染色檢測(cè)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。
　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建前列腺癌雙重靶向殺傷模式能有效的誘導(dǎo)基因修飾的MSC在腫瘤部位聚集，并持續(xù)釋放重組靶向殺傷分子對(duì)腫瘤實(shí)現(xiàn)有力的抑制作用。這種雙靶向的治療策略的提出是對(duì)前列腺癌傳統(tǒng)治療策略的一種有力的補(bǔ)充，并且對(duì)于臨床靶向治療的