前列腺癌細胞凋亡通路基因表達研究.pdf

1、復旦大學博士后學位論文前列腺癌細胞凋亡通路基因表達研究姓名：陳輝熔申請學位級別：博士后專業(yè)：外科學（泌尿外科）指導教師：夏術階20040801和PC一3，評價凋亡反應性。收集LNCaP和PC一3細胞后提取總RNA，合成eDNA探針并以生物素標記，在凋亡通路特異基因寡核苷酸片段cDNA膜上進行雜交反應，檢測基因mRNA表達。(2)米托蒽醌、輻射與去雄激素作用前列腺癌細胞LNCaP，MTT實驗和凋亡細胞染色分別評價細胞毒性和誘導凋亡作用。收

2、集細胞提取總RNA并合成eDNA探針，在凋亡通路特異基因eDNA膜上進行雜交反應檢測基因mRNA表達，并以RTPCR確認mRNA表達。(3)米托蒽醌作用LNCaP細胞，收集良性前列腺增生組織和前列腺癌組織，提取細胞總RNA，RT—PCR分別檢測TNFRSF8IImRNA表達，sP法檢測LNCaP細胞Ki1抗原的表達。結果：(1)Etoposide均能誘導兩種細胞凋亡，但PC3細胞的凋亡反應性小于LNCaP細胞。與LNCaP細胞比較，PC

3、一3細胞顯著下調的基因有BCLIO、CIDEA、GADD45a和RIP2，以及Caspase4、5和6，顯著上調的基因為TRAF4。兩種細胞均強烈表達caspase一14和TNFR2。(2)米托蒽醌和輻射與去雄激素分別可協(xié)同誘導前列腺癌細胞凋亡。米托蒽醌使TNFRSF8Ⅱ和TRAILR3基因mRNA表達上調，而輻射使DFFA、LTbR、mdm2、Myd88、TNFRSF8II、TNFRSFl4和TNFSF4基因mRNA表達上調，同時使S

4、urvivin和Bar基因mRNA表達下調。去雄激素使Mcl1、TNFRSFl4、MyD88和TNFSF4基因mRNA表達上調，使Bar、Survivin和TRAILR3基因mRNA表達下調。(3)米托蒽醌作用LNCaP細胞后的不同時間段均有TNFRSF8IImRNA表達，良性前列腺增生組織和前列腺癌組織也有TNFRSF8IImRNA表達。LNCaP細胞不表達Ki一1抗原。結論：(1)凋亡通路基因表達改變與前列腺癌細胞凋亡反應性不同有關