葛花對酒精性肝損傷的影響及其毒性研究.pdf

1、目的:通過建立酒精性肝損傷動物模型，為葛花對酒精性肝損傷的研究奠定基礎(chǔ)，構(gòu)建一個研究平臺。觀察葛花對酒精性肝損傷大鼠的影響，探討葛花對酒精性肝損傷的作用及作用機理。并通過系統(tǒng)的毒理學(xué)試驗{急性毒性試驗、致突變試驗（Ames試驗、骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗）、90天喂養(yǎng)試驗}，了解葛花是否存在潛在的毒副作用。為進(jìn)一步研發(fā)葛花保健產(chǎn)品及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:1、葛花對酒精性肝損傷的影響:(1)建立大鼠酒精性肝損傷動物模型，將

2、SD大鼠按體重隨機分為2組:模型組與對照組，對照組給予蒸餾水，模型組給予50％乙醇，灌胃劑量均為10ml/kg。連續(xù)灌胃4周，末次灌胃后禁食16小時摘眼球取血并制備10％肝組織勻漿。測定血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)活性，血清和肝勻漿中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、蛋白質(zhì)羰基等生化指標(biāo)并進(jìn)行肝組織病理學(xué)檢查。(2)酒精性肝損傷模型建立后，將SD大鼠按體重隨機分為7組:

3、空白對照組、酒精模型組、陽性對照組及葛花低、中、次高、高劑量組，每日上午空白對照組灌胃蒸餾水;其他各組灌胃50％乙醇進(jìn)行染毒，灌胃劑量10ml/kg;下午葛花低、中、次高、高劑量組分別給予0.625g/kg、1.25g/kg、2.50g/kg、5.0g/kg葛花提取物溶液，陽性對照組給予水飛薊素100mg/kg，灌胃劑量為10mL/kg，連續(xù)灌胃4周;末次灌胃后禁食16小時摘眼球取血并制備10％肝組織勻漿，測定血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)

4、、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)活性，血清和肝勻漿中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、蛋白質(zhì)羰基等生化指標(biāo);稱取肝臟，計算肝臟系數(shù)取肝左葉，作常規(guī)石蠟切片，進(jìn)行HE染色，觀察肝臟病理切片。2、按照《食品安全性毒理學(xué)評價程序與方法》(GB15193-2003)規(guī)范對葛花進(jìn)行安全性評價，分別進(jìn)行經(jīng)口急性毒性試驗、致突變試驗(Ames試驗、骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗、精子畸變試驗)以及90天喂養(yǎng)試驗。

5、>　　結(jié)果:1、葛花對酒精性肝損傷的影響:(1)酒精性肝損傷模型建立中，與空白對照組比較，模型組血清中ALT、AST酶活性顯著升高(P＜0.05);血清及肝組織中SOD活性顯著降低(P＜0.05); MDA、蛋白質(zhì)羰基含量顯著升高(P＜0.05);模型組肝組織中均見不同程度的病理變化，主要以肝臟出現(xiàn)大量脂肪空泡為主，部分大鼠肝臟肝細(xì)胞發(fā)生輕微腫脹、炎癥細(xì)胞發(fā)生浸潤，大鼠酒精性肝損傷模型建立成功。(2)葛花對酒精性肝損傷的影響實驗中，葛花

6、各劑量組與模型組比較，血清中ALT、AST酶活性降低，血清及肝組織中SOD活性升高，MDA、蛋白質(zhì)羰基含量降低，其中2.5g/kg、5.0g/kg劑量組差異有顯著性(P＜0.05)。葛花各劑量組肝臟病理變化與模型組比較有不同程度的減輕，其中以葛花高劑量組減輕較明顯(P＜0.05)，檢測結(jié)果表明:葛花對酒精性肝損傷具有保護(hù)作用。2、葛花安全性評價:急性毒性試驗MTD＞36g/kg BW，屬無毒級;Ames試驗顯示各個劑量組的回變菌落數(shù)均未

7、超過自然回變菌落數(shù)的2倍，且無劑量反應(yīng)關(guān)系，實驗結(jié)果為陰性;骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗結(jié)果顯示葛花各劑量組小鼠微核發(fā)生率與溶劑對照組比較，均無顯著性差異(P＞0.05)，各組PCE/PNE染紅細(xì)胞的比值與溶劑組比較，無顯著性差異(P＞0.05)，表明葛花對動物體細(xì)胞無明顯抑制作用;精子畸變試驗結(jié)果顯示各劑量組小鼠精子畸形數(shù)與溶劑對照組比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，表明葛花對動物生殖細(xì)胞不產(chǎn)生畸變作用;90天喂養(yǎng)試驗顯示葛花各劑量組