pH區(qū)帶逆流色譜法分離七種植物中生物堿的方法研究.pdf

1、我國含有非常豐富的中草藥植物資源，其含有的化學成分種類很多、結構非常復雜、生理活性較強、臨床應用價值較高。如生物堿（alkaloids），是一種存在于生物體內的堿性含氮化合物，可作為植物藥品、功能食品、保健品的重要物質資源，亟需開發(fā)利用。但是植物資源中多數(shù)生物堿類化合物具有結構復雜、種類多、含量低等特點，造成其分離純化難度較大，影響了其開發(fā)利用。本論文針對不同類型生物堿類化合物的分離純化技術難題，探討采用一種新型液液色譜分離技術--pH

2、區(qū)帶逆流色譜（PZRCCC）分離純化不同類型生物堿類化合物的可行性，研究pH區(qū)帶逆流色譜溶劑體系對不同類型生物堿分離純化的特點規(guī)律，建立基于pH區(qū)帶逆流色譜關鍵分離技術的，針對天然產(chǎn)物中不同類型生物堿類化合物的快速提取、富集、分離純化、結構鑒定方法體系，為天然產(chǎn)物中生物堿類化合物的分離純化和開發(fā)利用提供新方法、新思路。主要內容如下：
　　1.研究建立了pH區(qū)帶逆流色譜法分離純化吲哚類生物堿的方法。
　　本研究應用pH區(qū)帶逆流

3、色譜法，以吳茱萸和蘿芙木為試材，考察了分離溶劑系統(tǒng)的構成、比例、酸堿濃度等參數(shù)對逆流色譜分離的影響。結果表明:采用氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3:1:3:3，v/v）溶劑系統(tǒng)，可實現(xiàn)色胺吲哚類生物堿--吳茱萸堿和去氫吳茱萸堿的良好分離，應用該方法從2 g吳茱萸粗品中一次性分離純化得到吳茱萸堿101mg和去氫吳茱萸堿304 mg，純度分別為90.0％和93.1%；選擇石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（5:5:2:8，v/v）四相溶劑體系，可實現(xiàn)單

4、萜吲哚類生物堿的良好分離，并且從3g蘿芙木粗品中一次性分離純化得到-利血平112mg和育亨賓21mg，純度均為90.0%以上，以上化合物均采用NMR、MS進行了結構鑒定。
　　2.研究建立了pH區(qū)帶逆流色譜法分離純化高極性苯并菲啶類生物堿的方法。
　　本研究應用pH區(qū)帶逆流色譜法，以博落回和金果欖為試材，研究了分離溶劑系統(tǒng)的構成、比例、上樣量等參數(shù)對高極性苯并菲啶類生物堿的影響。結果表明：選擇氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3:1

5、:3:2，v/v）溶劑系統(tǒng)，上樣量為2 g，可實現(xiàn)高極性苯并菲啶類生物堿的分離，并且從2g博落回粗品中一次性分離純化得到白屈菜紅堿600 mg和血根堿750mg，其純度均高于95.0%；選擇氯仿-甲醇-水（4:3:2，v/v）為溶劑系統(tǒng)，實現(xiàn)了苯并菲啶類生物堿--巴馬汀和原小檗堿類生物堿--藥根堿這兩種高極性生物堿的成功分離，并從2 g金果欖粗提物中分離純化得到兩類生物堿巴馬汀512 mg和-藥根堿421 mg，HPLC純度均在95.0

6、%以上，以上化合物均采用NMR、MS進行了結構鑒定。
　　3.研究建立了二次萃取-pH區(qū)帶逆流色譜法分離純化哌啶類生物堿的方法。
　　本研究采用pH區(qū)帶逆流色譜法，以檳榔為試材，根據(jù)此類生物堿的物理化學性質，結合二次萃取，研究了分離溶劑系統(tǒng)的構成、比例、上樣量等參數(shù)對逆流色譜分離的影響。結果表明：選擇石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（3:7:3:7，v/v）四相體系，從1g經(jīng)過兩次萃取得到的檳榔粗品中分離得到哌啶類生物堿--檳榔堿

7、75 mg，純度為91.0%，該化合物采用NMR、MS進行了結構鑒定。
　　4.研究建立了 MCI柱富集純化-pH區(qū)帶逆流色譜二次純化法分離純化大環(huán)類生物堿的方法。
　　本研究應用pH區(qū)帶逆流色譜法，以番木瓜葉為試材，根據(jù)大環(huán)類生物堿的性質，結合MCI柱洗脫處理，研究了分離溶劑系統(tǒng)的構成、比例等參數(shù)對逆流色譜分離的影響。結果表明：采用MCI柱富集純化，可以較好地去除色素等基質的影響，實現(xiàn)大環(huán)類生物堿類化合物的初步富集;分別選

8、擇四元溶劑系統(tǒng)石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（5:5:2:8，v/v）和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（5:5:1:9，v/v）串聯(lián)使用，從2 g番木瓜葉粗提物中分離得到大環(huán)類生物堿--番木瓜堿60mg、偽番木瓜堿71 mg，其純度均大于90.0%，以上化合物均采用NMR、MS進行了結構鑒定。
　　5.研究建立了超聲提取-pH區(qū)帶逆流色譜法分離純化阿普菲類生物堿的方法。
　　本研究應用pH區(qū)帶逆流色譜法，以烏藥為試材，根據(jù)此類生物堿

9、的結構特性，與超聲提取相結合，研究了分離溶劑系統(tǒng)的構成、比例等參數(shù)對pH區(qū)帶逆流色譜分離的影響。結果表明：選擇氯仿-甲醇-水（4:3:3，v/v）為三相溶劑系統(tǒng)，從1g烏藥粗提物中分離得到阿普菲類生物堿--波爾定堿150 mg，其純度高于95.0%，該化合物采用NMR、MS進行了結構鑒定。
　　通過系統(tǒng)考察pH區(qū)帶逆流色譜法對上述幾種天然產(chǎn)物中不同類型生物堿的分離純化條件，確定了運用此方法分離生物堿的的一般步驟：根據(jù)天然產(chǎn)物中生物