pH-區(qū)帶逆流色譜分離甘蔗皮及蓮屬植物中有效成分的研究.pdf

1、甘蔗和蓮屬植物在我國(guó)資源豐富，但是人們對(duì)廢棄的甘蔗皮和蓮屬植物中有效成分的研究并不深入，從而造成大量天然植物資源的浪費(fèi)。pH-區(qū)帶逆流色譜作為一種高效的液-液分配色譜技術(shù)，主要根據(jù)不同物質(zhì)疏水性和解離常數(shù)pKa值的差異性來(lái)實(shí)現(xiàn)分離，具有進(jìn)樣量大、回收率高等特點(diǎn)。本文應(yīng)用該技術(shù)分離純化甘蔗皮中的酚酸。離子液體是一類(lèi)性能獨(dú)特的萃取溶劑，這不僅因?yàn)樗哂袩岱€(wěn)定性好、不易燃等特點(diǎn)，還因?yàn)樗梢耘c水或弱極性有機(jī)溶劑形成兩相體系，這使它可以作為溶劑

2、用于萃取分離中。本文將離子液體多選擇性萃取分離特點(diǎn)與pH-區(qū)帶逆流色譜分離優(yōu)勢(shì)相結(jié)合，研究了離子液體pH-區(qū)帶逆流色譜體系在分離純化蓮屬植物中的應(yīng)用。主要得到的結(jié)論與研究成果如下:
　　1、建立了pH-區(qū)帶逆流色譜分離純化甘蔗皮中酚酸的方法。溶劑體系確定為甲基叔丁基醚-乙腈-水(4∶1∶5，v/v)，以上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，保留酸TFA濃度為5 mM，洗脫堿NH3H2O濃度為3 mM，從1.00 g的甘蔗皮粗提物中分離出

3、4.8 mg的咖啡酸、12.9 mg的阿魏酸、65.2 mg的香豆酸，三種物質(zhì)的純度分別為93.4％，94.6％和98.8％。
　　2、研究了甘蔗皮酚酸的抗氧化活性能力。采取清除DPPH自由基和總抗氧化能力T-AOC兩種方法對(duì)甘蔗皮中分離得到的三種酚酸進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示此三種酚酸均有自由基清除能力和抗氧化能力，且從甘蔗皮中分離出來(lái)的單一酚酸的抗氧化性強(qiáng)于粗品中的混合酚酸。
　　3、優(yōu)化了蓮植株粗提物的萃取方法。采用

4、抗氧化活性IC50評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化了蓮植株粗提物的萃取方法，結(jié)果表明二氯甲烷萃取部位表現(xiàn)出一定的清除DPPH自由基的能力，其IC50值為110.5μg/mL，這說(shuō)明二氯甲烷萃取部位富含豐富的生物堿抗氧化活性成分。建立了DPPH-HPLC快速篩選方法，從蓮植株中快速識(shí)別出六個(gè)具有不同程度抗氧化活性的生物堿物質(zhì)。
　　4、建立了離子液體pH-區(qū)帶逆流色譜分離蓮植株中六種生物堿的方法。在基礎(chǔ)逆流色譜溶劑體系上添加離子液體，研究不同類(lèi)型的離

5、子液體和離子液體加入量對(duì)蓮植株中結(jié)構(gòu)相似的生物堿分離效果的影響。將此方法應(yīng)用于荷葉和蓮子心中生物堿的分離。溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水-[C4mim][PF6](5∶2∶2∶8∶0.1，v/v)，保留堿和洗脫酸的濃度分別為10mM和3mM。一次性成功從1.00 g蓮子心粗品中得到37.3 mg蓮心堿、57.7 mg異蓮心堿和179.9 mg甲基蓮心堿，其純度分別為93.2％,96.5％和98.8％。同樣從1.05 g荷葉粗品中分

6、離出45.6 mg N-去甲荷葉堿、21.6 mg荷葉堿、11.7 mg蓮堿，純度分別為96.9％，95.6％和91.33％。
　　5、研制了荷葉堿和甲基蓮心堿國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品。將荷葉和蓮子心中含量較高的荷葉堿和甲基蓮心堿研制成國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品，采用pH-區(qū)帶逆流色譜大量制備荷葉堿和甲基蓮心堿，并進(jìn)行了多種條件的HPLC純度鑒定和結(jié)構(gòu)確證。然后進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性的考察，結(jié)果表明均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，最后聯(lián)合八家實(shí)驗(yàn)室共同定值，確定荷葉堿和甲