若干藥用植物有效成分的反相高效液相色譜分離分析方法研究.pdf

1、來源于大自然的中藥是凝聚了人類千百年智慧的結(jié)晶，已成為我國臨床廣泛使用的特色藥品。在2009年發(fā)布的《國家基本藥物目錄》里，中成藥占全部品種的三分之一。由于歷史上受限于當(dāng)時的科技水平，許多中成藥的藥效物質(zhì)及作用機(jī)制均不甚明了，導(dǎo)致難以確保這些藥品的安全、有效和質(zhì)量可控。近十幾年來，我國政府大力推進(jìn)中藥現(xiàn)代化研究，倡導(dǎo)采用現(xiàn)代科技手段對中成藥進(jìn)行二次開發(fā)，從而提高中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和臨床療效；另一方面，實施國家科技重大專項，開展現(xiàn)代中藥新藥創(chuàng)制

2、研究，努力實現(xiàn)“藥效物質(zhì)基本明確、作用機(jī)制基本清楚”的目標(biāo)。這就對中藥及天然藥物化學(xué)研究提出了極大挑戰(zhàn)，同時也為生物化學(xué)工程學(xué)科開辟新方向提供了歷史機(jī)遇。
　　 尋找發(fā)現(xiàn)中藥或藥用植物活性成分，揭示其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制是中藥研究領(lǐng)域的核心科學(xué)問題之一，其關(guān)鍵點是建立先進(jìn)適宜的分離分析方法。換句話說，中藥或藥用植物化學(xué)物質(zhì)的有效分離和成分鑒定是中藥現(xiàn)代化研究重點。高效液相制備色譜具有高分離效率和多種分離模式等特點，已成為分離

3、復(fù)雜物質(zhì)體系的有力工具，決定其分離效能的關(guān)鍵因素是色譜操作條件。目前，制備液相色譜的分離條件主要憑經(jīng)驗選定，存在較大的盲目性。為此，極有必要深入研究液相制備色譜分離理論模型及洗脫規(guī)律，進(jìn)而創(chuàng)新發(fā)展液相制備色譜分離條件優(yōu)化方法。
　　 本文首先選取莢蓬和雞血藤為具體研究對象，采用傳統(tǒng)的分離方法制備得到化學(xué)組分。通過對英蓮的甲醇提取物中化學(xué)成分的分析，鑒定，發(fā)現(xiàn)了一個新的化合物2’-(β-glucopyranosyloxy)-ben

4、zyl3-(β-glucopyranosyloxy)-benzoate。通過體外細(xì)胞試驗，篩選出雞血藤中抗癌活性組分，并采用RP-HPLC-MSn對活性組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，推斷出相應(yīng)的化學(xué)組成主要為9種黃酮類物質(zhì)。其中，7-羥基-3'，4’-二甲氧基-異黃酮、7-羥基-6，2’，4’-三甲氧基-異黃酮和3’-羥基-7，4’-二甲氧基-異黃酮在該植物中均為首次報導(dǎo)。
　　 在分析型RP-HPLC對雞血藤黃酮類化合物分離分析的基礎(chǔ)上，

5、根據(jù)吸附分離原理，結(jié)合現(xiàn)有的液相色譜保留模型，采用matlab軟件建立了計算模塊，實現(xiàn)了對同種物質(zhì)在制備型RP-HPLC上保留時間的預(yù)測。在設(shè)定分離指標(biāo)后，可優(yōu)化選擇制備型RP-HPLC的分離操作條件。與憑借色譜操作者經(jīng)驗確定制備液相色譜分離條件的傳統(tǒng)方法相比，本文所建方法可在藥用植物種類變化和化學(xué)組成波動的情況下，便捷、可靠地優(yōu)化選擇制備色譜分離條件，提高植物成分的分離效率，節(jié)約大量的樣品和溶劑。
　　 在上述制備液相色譜分離

6、條件預(yù)測與優(yōu)化方法研究的基礎(chǔ)上，作者進(jìn)一步研究開發(fā)了新的SID集成方法，用以分離和鑒定植物中的酚酸類成分，并能高通量、便捷地測定復(fù)雜物質(zhì)體系中傳統(tǒng)方法較難測定的重要物性參數(shù)pKa值。該流程由酚酸物質(zhì)判定、pKa預(yù)測定、制備色譜分離條件優(yōu)化、純品制備、物質(zhì)鑒定和pKa確定等六個步驟組成。本文選取丹參酚酸體系開展實例研究，采用SID集成方法測定了丹參素、咖啡酸、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A的pKa值。在優(yōu)化的制備色譜分離條件下，制得