液相色譜方法用于復雜體系的分離分析研究.pdf

1、論文將高效液相色譜、開管柱色譜、制備色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等現(xiàn)代色譜技術(shù)應(yīng)用于兩類復雜體系-中草藥提取物和卟啉類催化劑的分離分析研究。主要研究內(nèi)容包括兩部分：第一部分以杜仲(Eucommia ulmoides)中降血壓活性成分為目標，應(yīng)用各種色譜技術(shù)對杜仲中環(huán)烯醚萜類和木脂素化合物進行了提取、分離、分析與結(jié)構(gòu)表征研究，將升血壓組分與降血壓成分分離，得到了5種活性單體化合物一京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、丁香脂素二葡萄糖苷和綠原酸

2、，所得到的單體采用HPLC、UV、IR、HNMR、LC-MS等儀器手段進行定性、定量分析，確定了其結(jié)構(gòu)；第二部分系統(tǒng)地研究了5，10，15,20-四苯基卟啉鈷(CoTPP)及其中間產(chǎn)物5，10，15,20-四苯基卟啉(TPP)的合成、分離純化及其純度檢測方法，制備了高純度的對照品。所提純的產(chǎn)品采用HPLC、UV-VIS、IR、HPLC-MS等儀器分析手段進行定性、定量表征，確證其結(jié)構(gòu)。建立了仿生催化氧化環(huán)己烷技術(shù)工業(yè)化應(yīng)用中CoTPP催

3、化劑濃度的HPLC定量分析方法，為仿生催化劑CoTPP的研制、大規(guī)模生產(chǎn)和工業(yè)應(yīng)用提供了實驗依據(jù)與基礎(chǔ)。 具體內(nèi)容摘要如下： 1.杜仲中活性成分的提取系統(tǒng)地研究了常規(guī)溶劑提取法、酶提取法、半仿生提取法和超臨界CO2提取法從杜仲中提取京尼平苷酸(GPA)、京尼平苷(GPS)、桃葉珊瑚甙(AU)、松脂醇二葡萄糖甙(PDG)、丁香脂素二葡萄糖苷(SDG)和綠原酸(CA)的方法，對這四種方法的提取效果進行了比較，得到了最優(yōu)提取工

4、藝一半仿生提取法。 2.硅膠柱色譜制備杜仲中活性成分采用硅膠柱色譜法制備得到高純度的京尼平苷、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷單體，所得京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷純度分別為98.69％、96.54％、92.1 8％和93.77％。 3.制備型反相高效液相色譜制備杜仲中活性成分采用制備型反相高效液相色譜制備得到高純度的京尼平苷、京尼平苷酸、和綠原酸單體，所得京尼平苷酸、京尼平

5、苷和綠原酸純度分別為95.61％，93.28％和96.57％，并以京尼平苷酸為例，采用前沿分析法研究了其在C18柱上的吸附機理。 4.杜仲中活性成分的純度測定和結(jié)構(gòu)鑒定采用HPLC-DAD建立了兩種方法分別測定杜仲中的木脂素類化合物、環(huán)烯醚萜類化合物和綠原酸(CA)。(1)建立了同時測定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷的高效液相色譜方法。(2)建立了同時測定杜仲中京尼平苷酸、京尼平苷和綠原酸的反相高效液相色譜方法。

6、 從杜仲中分離得到5個化合物經(jīng)化學分析、波譜分析分別鑒定為丁香脂素二葡萄糖苷、松脂醇二葡萄糖苷京尼平苷酸、京尼平苷、綠原酸。采用靜脈注射的方式對杜仲提取物的降壓作用作了初步探討，動物實驗結(jié)果表明，環(huán)烯醚萜類提取物的降壓效果顯著，最大降壓效應(yīng)、最大降壓百分比及作用維持時間在不同劑量組間存在顯著性差異。靜脈注射杜仲提取物可致SHR大鼠血壓下降，這種降壓作用呈劑量依賴性。 5.RP-HPLC用于杜仲原藥材指紋圖譜的研究采用RP-H

7、PLC建立了杜仲原藥材指紋圖譜。以京尼平苷酸作為參照物，確定杜仲原藥材指紋圖譜中的20個共有峰，并用炮制后的杜仲藥材檢驗了指紋圖譜。 6.CoTPP和TPP的純化采用溶劑萃取分離-氧化鋁柱層析的方法得到了高純度的TPP，四苯基卟啉純度可達99.85％、總回收率達88.98％；利用CoTPP和TPP在溶劑A中的溶解性不同實現(xiàn)了CoTPP的純化，純化收率達81.95％以上，純化后CoTPP純度由29.57％、38.79％、32.34

8、％提高到76.41％、81.37％、74.29％。 7.RP-HPLC法測定TPP采用反相高效液相色譜法測定TPP的含量。流動相為甲醇：水=85:15(v/v)，TPP濃度在0.5μg/mL-2.5μg/mL之間線性關(guān)系良好，加標回收率在95.2％.106.1％之間。該法簡便快速。采用UV-VIS、IR、LC-ESI-MS等儀器分析手段對TPP的結(jié)構(gòu)進行了表征。 8.RP-HPLC法測定CoTPP研究建立了CoTPP的反

9、相HPLC測定方法。流動相為甲醇：乙腈：氯仿=7:3:1(v/v)，CoTPP濃度在1.0/μg/mL-5.0μg/mL之間線性關(guān)系良好，加標回收率為95.05％-102.4％，RSD為0.54％。采用UV-VIS、IR等儀器分析手段鑒定了CoTPP的結(jié)構(gòu)，確認了目標化合物的合成。 9.CoTPP和TPP測定方法在工業(yè)中實際應(yīng)用結(jié)合項目應(yīng)用單位的實際情況，研究建立了同時測定CoTPP和TPP的反相HPLC方法。以甲醇：乙腈：氯仿