藜蒿有效成分分離分析方法及其藥用機(jī)理研究.pdf

1、藜蒿作為一種開發(fā)前景較好的野生植物資源,具有止血消炎、鎮(zhèn)咳化痰、開胃健脾、散寒除濕等多種功效,藥用價值極高。本文以藜蒿為研究對象,以現(xiàn)代新興樣品前處理技術(shù)為手段,從藜蒿中選擇性提取以蘆丁為代表的黃酮類活性成分,系統(tǒng)研究了各因素對提取率的影響,確定了活性成分最優(yōu)提取及純化條件;同時建立了藜蒿藥材指紋圖譜質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行了分子印跡固相萃取法(MISPE)選擇性分離提取藜蒿等中藥中的活性成分蘆丁的研究,并對藜蒿黃酮類代表物質(zhì)蘆丁的衍生物與蛋

2、白質(zhì)的相互作用機(jī)理進(jìn)行了研究,以期為新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。具體內(nèi)容如下:
　　 1、超聲輔助提取藜蒿中活性成分蘆丁
　　 建立了一種超聲輔助萃取.高效液相色譜方法提取并定量檢測藜蒿中的活性成分蘆丁。通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)對其提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,得到最佳提取條件為:采用體積比為90:10的甲醇.乙醇體系,在固液比為1:30 g/mL的條件下超聲提取40 min。為了體現(xiàn)超聲輔助提取的優(yōu)越性,將該方法與其他幾種提取方法進(jìn)行

3、了比較,其中包括微波輔助提取、冷凝回流提取及室溫冷浸提取法。用高效液相色譜法測定蘆丁含量,分析準(zhǔn)確、快速,線性范圍在0.34～20.7μg/mL之間。樣品的平均回收率為100.77％,RSD為0.37％(n=5)。最后對不同產(chǎn)地的藜蒿生藥材中蘆丁的含量進(jìn)行了檢測。因產(chǎn)地不同,藜蒿中蘆丁的含量存在顯著差異,蘆丁的總含量分別為9.90,6.23,5.56 mg/g。
　　 2、分子印跡固相萃取法(MISPE)選擇性提取復(fù)雜中藥中活性

4、成分蘆丁
　　 將改進(jìn)的分子印跡制備方法運(yùn)用于蘆丁分子印跡聚合物的制各工藝。該方法建立在超聲洗脫模板分子的基礎(chǔ)上,采用本體聚合法進(jìn)行聚合物制備,以蘆丁為模板分子,丙烯酰胺為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸脂為交聯(lián)劑,在四氫呋喃的極性環(huán)境中熱引發(fā)聚合。同時比較了幾種不同模板分子洗脫方法,并運(yùn)用紅外及電鏡掃描對聚合物微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。接著運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)評價了該聚合物的識別機(jī)制及吸附能力。將其作為固相萃取柱的吸附劑,研究了分子印跡聚

5、合物對蘆丁的選擇性吸附性能,同時考察了其對實(shí)際樣品中活性成分蘆丁的分離富集能力。結(jié)果表明:該固相萃取柱對蘆丁兩種結(jié)構(gòu)類似物的選擇性系數(shù)分別為2.80和5.46。該分子印跡固相萃取柱對蘆丁具有較佳的回收率(85％～91％)和高度選擇性,為從中藥中高效分離富集蘆丁提供了一種新途徑。
　　 3、藜蒿二維指紋圖譜的創(chuàng)建
　　 建立了包含色譜及光譜信息的藜蒿二維指紋圖譜。與固定檢測波長的一維指紋圖譜相比,二維指紋圖譜信息數(shù)據(jù)量更大

6、,包含更多樣品信息,能更全面的控制藜蒿的質(zhì)量。同時利用二維數(shù)據(jù)所含信息,對樣本進(jìn)行相似度評價、聚類分析及主成分分析評價。相似度評價結(jié)果將不同來源的藜蒿樣品分為兩組:0.9883.0.9839及0.8853-0.8907,其樣品的來源分別對應(yīng)于南方及北方,表明地理位置相近的藜蒿樣品性質(zhì)相似,進(jìn)而的聚類分析及主成分分析也得到了相似的結(jié)果。
　　 該方法具有良好的系統(tǒng)性、特征性和重現(xiàn)性,為藜蒿的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。
　　 4、

7、蛋白質(zhì)與藜蒿活性成分蘆丁衍生物相互作用機(jī)理研究
　　 首先用蘆丁和環(huán)氧乙烷反應(yīng)得到蘆丁衍生物—曲克蘆丁(troxerutin,TRO),接著應(yīng)用光譜技術(shù)研究曲克蘆丁與人血清白蛋白(human serum albumin,HAS)間的作用機(jī)制。結(jié)果表明:曲克蘆丁對HAS的熒光猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅;TRO與HAS作用時結(jié)合比為2;反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)△H＞0,△S＞0。結(jié)論:曲克蘆丁與HAS之間的主要作用是疏水作用力;曲克蘆丁的加入使HA