淫羊藿有效成分分析及其體內(nèi)代謝的研究.pdf

1、淫羊藿(Epimedii Folium)是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornumMaxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊蓉Epimedium wushanense T.S.Ying或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥葉,具有“補(bǔ)腎陽,強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕”

2、的傳統(tǒng)功效。現(xiàn)代藥理研究表明,淫羊藿能增加心腦血管血流量,改善生殖系統(tǒng)功能,促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝,具有抗衰老、抗腫瘤等功效。淫羊藿化學(xué)成分研究表明,其主要成分是異戊烯基黃酮,如淫羊藿苷,寶藿苷Ⅰ等。中國藥典也采用測定淫羊藿藥材或飲片中的淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ的含量對淫羊藿進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　 本論文首先建立了一個(gè)快速、準(zhǔn)確、便捷的高效液相色譜-紫外檢測器-傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-UV/FTICRMS)的方

3、法,對7種不同來源的淫羊藿藥材中的黃酮成分進(jìn)行在線分析檢測,得到了這些化合物準(zhǔn)分子離子的高分辨質(zhì)量數(shù),測定精確質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度均小于2 ppm,并通過采用Data Dependent Scan模式獲得準(zhǔn)分子離子峰的多級質(zhì)譜碎片的數(shù)據(jù)。通過準(zhǔn)分子離子的高分辨數(shù)據(jù)計(jì)算了其分子組成,并結(jié)合多級碎裂質(zhì)譜碎片的數(shù)據(jù)及淫羊藿異戊烯基黃酮的質(zhì)譜裂解規(guī)律,鑒定和推測了淫羊藿藥材中68種黃酮成分的結(jié)構(gòu)。通過高分辨質(zhì)譜提取離子流獲得的峰面積數(shù)據(jù),明確了這68種

4、淫羊藿黃酮成分中最主要的黃酮成分。接著通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)技術(shù),對7個(gè)主要淫羊藿黃酮成分(朝藿定A,B,C,淫羊藿苷,2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,箭藿苷B和寶藿苷Ⅰ)進(jìn)行定量分析,一共分析了35個(gè)不同來源不同產(chǎn)地的淫羊藿藥材。采用主成分分析(PCA)方法和聚類分析方法分別對定量分析結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。通過PCA分析構(gòu)建了一個(gè)綜合評價(jià)函數(shù),結(jié)果表明該評價(jià)函數(shù)不但可以反映總黃酮含量的高低,而且可以反映不同黃酮成

5、分相對含量的變化,是一個(gè)具有前景的中藥材質(zhì)量評價(jià)方法。聚類分析表明,不同來源淫羊藿藥材按照黃酮含量的高低可以分為低、中、高三個(gè)組,分類結(jié)果與綜合評價(jià)函數(shù)所得結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在質(zhì)量評價(jià)上,應(yīng)該采用多成分同時(shí)定量的方法評價(jià)淫羊藿的質(zhì)量,并選擇合適的統(tǒng)計(jì)處理方法,構(gòu)建質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)。
　　 本論文運(yùn)用HPLC-FTICRMS分析技術(shù),分析檢測了大鼠口服朝鮮淫羊藿水提物后體內(nèi)有效成分及其代謝產(chǎn)物,得到了這些化合物分子離子和多級碎裂的

6、碎片離子的高分辨質(zhì)量數(shù)和多級質(zhì)譜信息,測定精確質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度均小于3 ppm,計(jì)算了分子組成；依據(jù)多級質(zhì)譜數(shù)據(jù),總結(jié)質(zhì)譜裂解規(guī)律,共分析和鑒定了大鼠體內(nèi)出現(xiàn)的9個(gè)黃酮類成分,其中3個(gè)首次在大鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。通過比較給藥液和體內(nèi)生物樣本的差異,推斷了淫羊藿總黃酮在大鼠體內(nèi)可能的代謝途徑。通過代謝產(chǎn)物的鑒定和代謝途徑的研究,證實(shí)了淫羊藿異戊烯基黃酮的體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)換主要是Ⅰ相代謝(去糖基化),以及進(jìn)一步發(fā)生的Ⅱ相代謝(乙?；?。
　　 基于藥

7、材中主要藥效成分的定量分析和大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物研究鑒定的結(jié)果,選擇大鼠體內(nèi)出現(xiàn)的主要7個(gè)黃酮類成分作為研究對象,建立了超高效液相色譜與串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-MS/MS)的分析方法進(jìn)行大鼠體內(nèi)代謝指紋圖譜的研究,研究結(jié)果表明,7個(gè)主要的黃酮成分均廣泛分布于大鼠不同的組織臟器中,可以代表淫羊藿藥材在體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)變化情況,是淫羊藿體內(nèi)的重要藥效物質(zhì)。另外研究結(jié)果也表明,色譜指紋圖譜不同的兩類淫羊藿,其體內(nèi)代謝指紋圖譜也明顯不同。