蘇木抗癌有效成分分析及其對膀胱癌細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的：從蘇木提取物中尋找抗癌有效成分，觀察其對膀胱癌細(xì)胞的生長抑制作用，探討其誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡作用及機制。建立膀胱癌移植瘤模型，觀察其對荷瘤動物的抗腫瘤作用。
　　 方法：采用不同溶劑從蘇木中提取出粗提物，液相色譜法測定各提取物中幾種主要組分的含量；以人膀胱癌T24細(xì)胞為靶細(xì)胞，采用錐蟲藍(lán)拒染法測定各提取物20、40、60、80、100min時對靶細(xì)胞的殺傷率；選擇與殺傷率具正相關(guān)性的主要組分，進行反復(fù)色譜層析，分離得到純度達(dá)到9

2、2％以上的單體；采用核磁共振、質(zhì)譜、紅外等波譜學(xué)方法對該單體進行結(jié)構(gòu)測定。錐蟲藍(lán)拒染法觀察不同濃度的巴西木素不同時間對靶細(xì)胞的增殖抑制作用；均質(zhì)生物發(fā)光法檢測靶細(xì)胞內(nèi)Caspase-3,9的活性；流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測巴西木素對靶細(xì)胞的凋亡情況。在動物實驗中，以膀胱癌細(xì)胞株T24和BTT 制備腹腔和皮下移植瘤模型，兩種模型均隨機分為對照組、蘇木提取物（巴西木素含量>50％）組、絲裂霉素組。記錄小鼠出現(xiàn)腫瘤的時間，測量皮下腫瘤的

3、長經(jīng)和短徑，計算腫瘤體積及抑瘤率；記錄腹腔移植瘤模型荷瘤動物生存期，計算生命延長率。
　　 結(jié)果：蘇木抗癌有效成分的分析：粗提物中R12與細(xì)胞殺傷率呈正相關(guān)性(r100min=0.941,P<0.001)，鑒定R12的主要成分是巴西木素。
　　 細(xì)胞抑制實驗：不同濃度巴西木素對靶細(xì)胞的增殖影響不同，巴西木素濃度為25μg/ml時，4h內(nèi)無明顯影響(P>0.05)；不同濃度(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml

4、、200μg/ml)巴西木素與靶細(xì)胞作用8h，細(xì)胞抑制率分別為43.19％、60.73％、86.38％、93.89％(P<0.05)，以及50μg/ml的巴西木素與靶細(xì)胞作用不同時間(4、8、24、48h)后，細(xì)胞抑制率分別為52.72％、60.73％、91.77％、96.41％(P<0.05)；巴西木素與靶細(xì)胞作用16h后，在7.5-60μg/ml 范圍內(nèi)細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度增加呈現(xiàn)0.15％、1.35％、2.91％、34.76％的

5、上升趨勢，生物發(fā)光檢測25μg/ml 巴西木素作用后靶細(xì)胞內(nèi)Caspase-3,9的活性略有升高，但與對照無明顯差異(P>0.05)；激光共聚焦顯微鏡下可見靶細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 動物實驗：蘇木提取物在400、300、200mg/Kg 劑量下對荷瘤裸鼠生命延長率分別為58.42％、56.90％、51.50％(P<0.05)，對T739小鼠生命延長率分別為11.80％、4.32％、10.77％(P>0.05)；T739小鼠皮下移植

6、瘤模型對照組平均腫瘤體積1.092±0.403cm3，蘇木提取物300mg/Kg 劑量組平均腫瘤體積0.656±0.117cm3，絲裂霉素組平均腫瘤體積0.238±0.853cm3，對照組的平均腫瘤體積與蘇木提取物組及絲裂霉素組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，蘇木提取物與絲裂霉素的抑瘤率分別為40.25％、69.78％。結(jié)論：巴西木素是蘇木中主要抗癌活性物質(zhì)之一。巴西木素對人膀胱癌T24細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡