中藥有效成分靛玉紅對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的：中藥抗腫瘤成份靛玉紅可通過3種途徑對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)揮抑制作用，分別為競(jìng)爭(zhēng)性拮抗CDK激酶的ATP結(jié)合位點(diǎn)；抑制Src激酶、阻斷stat3信號(hào)通路；抑制核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。同時(shí)靛玉紅可與其配基AhR受體結(jié)合對(duì)其自身進(jìn)行調(diào)控。因此推測(cè)靛玉紅可抑制與CDK、Src激酶有關(guān)的人類腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)即通過多種腫瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)及MTT方法驗(yàn)證此推測(cè)。同時(shí)通過造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)，觀察靛玉紅對(duì)造血祖細(xì)胞的影響。 方法：用半固體細(xì)胞集落

2、培養(yǎng)方法觀察靛玉紅對(duì)的人白血病細(xì)胞株K562、人胃癌細(xì)胞株、人淋巴瘤細(xì)胞株、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60、肝癌、肝門膽管癌細(xì)胞株的影響。靛玉紅用二甲基亞砜溶解并稀釋為1mg/ml，100μ g/ml，10 μ g/ml不同劑量組，將藥物與細(xì)胞株經(jīng)37℃水浴作用30分鐘后，離心20分鐘，洗去藥物，細(xì)胞重新制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后加入培養(yǎng)體系，放入37℃飽和濕度5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天，觀察集落數(shù)目。分別給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3、(小鼠、大耳白兔)口服靛玉紅，給小鼠分別口服靛玉紅4mg/kg，8mg/kg，16mg/kg不同劑量，24小時(shí)后從小鼠眼眶取血并分離藥物血清；給兔口服靛玉紅藥物膠囊(133mg/kg),分別于服藥后2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)等不同時(shí)間取兔血漿，使用時(shí)直接將藥物血清/漿加入培養(yǎng)體系培養(yǎng)6天觀察宮頸癌、胃癌、K562、膽囊癌、肝門膽管癌集落數(shù)目。用MTT方法觀測(cè)靛玉紅對(duì)K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株的影響。同時(shí)用半固體細(xì)胞

4、集落培養(yǎng)方法，觀察靛玉紅及其藥物血清/漿對(duì)粒系、紅系、巨核系、混合系造血祖細(xì)胞的影響。 結(jié)果：靛玉紅對(duì)這幾種腫瘤存在廣泛的抑制作用。 1.靛玉紅對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果：靛玉紅濃度劑量在0.5-100 μ g/ml范圍內(nèi)體外對(duì)人宮頸癌、肝癌、淋巴瘤、肝門膽管癌、人紅白血病K562細(xì)胞株及人早幼粒白血病HL60細(xì)胞株均 2.不同濃度的小鼠藥物血清對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果：小鼠藥物血清對(duì)宮頸癌、胃癌

5、存在抑制作用。 3.服用相同劑量靛玉紅的兔藥物血漿對(duì)腫瘤紐胞生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果：靛玉紅兔藥物血漿對(duì)胃癌細(xì)胞株產(chǎn)生明顯的抑制作用，且服藥后2小時(shí)即出現(xiàn)顯著抑制作用，其抑制作用維持至服藥后96小時(shí)。對(duì)于K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株，靛玉紅兔藥物血漿的抑制作用在服藥后4-6小時(shí)出現(xiàn)，至服藥后96小時(shí)作用已有所減弱。 4 藥后24小時(shí)不等量鼠藥物血清對(duì)K562細(xì)胞的作用結(jié)果：服藥后24小時(shí)小鼠藥物血清，0.05ml至0.4

6、ml各組均對(duì)K562細(xì)胞存在抑制作用，但0.05ml組對(duì)K562細(xì)胞抑制作用較其他劑量(0.1-0.4ml)弱。 5.用MTT方法結(jié)果：靛玉紅兔血漿對(duì)K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株均存在抑制作用，每種細(xì)胞株對(duì)靛玉紅藥物血漿敏感性不同，K562在藥后2至24小時(shí)均被抑制，膽囊癌在藥后8小時(shí)才出現(xiàn)抑制作用，24小時(shí)抑制作用最強(qiáng)，而肝門膽管癌在藥后2小時(shí)出現(xiàn)抑制作用，隨后抑制作用逐漸減退。 6.靛玉紅對(duì)各系骨髓造血祖細(xì)胞的