抗炎有效成分對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的抑制作用及其機(jī)理研究.pdf

1、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）能降解幾乎所有的細(xì)胞外基質(zhì)成分.該論文首先建立了靈敏度、特異性強(qiáng)的測(cè)定MMP-9活性的明膠酶譜法（Gelatin Zymography）,其原理是：摻入聚丙烯酰胺凝膠中的明膠可被MMP-9降解,考馬斯亮蘭染色后在藍(lán)色的背景上出現(xiàn)白色的負(fù)染條帶,采用凝膠成像系統(tǒng)掃描并用其軟件分析表明,在一定范圍內(nèi)白色條帶的強(qiáng)度與MMP-9的活性呈正相關(guān).該實(shí)驗(yàn)觀察了18種具有抗

2、炎作用的藥物和化合物,如甾體類的地塞米松、氧化可的松和雌二醇以及非甾體類的環(huán)氧酶抑制劑Rofecoxib、5-脂氧酶抑制劑Zileutone和白三烯生成抑制劑白藜蘆醇等對(duì)PMA誘導(dǎo)的U937細(xì)胞上清中MMP-9活性的影響.該論文運(yùn)用小鼠巴豆油耳炎和免疫組化的方法進(jìn)一步在整體動(dòng)物模型上觀察了白藜蘆醇、地塞米松和吲哚美辛抗炎作用和MMP-9抑制作用的關(guān)系.該論文運(yùn)用Western Blot法觀察了這四個(gè)化合物對(duì)MMP-9蛋白生成的影響.MM

3、P-9作為一種分泌蛋白,在細(xì)胞內(nèi)合成后很快被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外,在細(xì)胞漿中幾乎沒有儲(chǔ)存,該論文用RT-PCR的方法觀察了MMP-9 mRNA水平的變化.該文用電泳遷移率變動(dòng)分析法（Electrophoretic mobility shift assays,EMSAs）研究了上述化合物對(duì)PMA誘導(dǎo)的U937細(xì)胞AP-1和NF-κB活化的影響.該論文研究了具有抗炎活性的藥物和化合物對(duì)體內(nèi)、外MMP-9的影響,并從蛋白、mRNA及核轉(zhuǎn)錄因子水平對(duì)其