基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）功能阻斷對大鼠腦復(fù)蘇的影響及其作用機(jī)理的研究.pdf

1、本研究采用氣管夾閉窒息法建立與腦復(fù)蘇患者具有可比性的大鼠全腦缺血缺氧性損害的腦復(fù)蘇模型，并在動物模型中使用近年來研制出來的新型高效的特異性的MMP 9抑制劑SB-3CT，以阻斷CPCR早期大鼠腦組織MMP9的表達(dá)和活性，并觀察腦組織MMP9的的表達(dá)和活性的變化，以及其對血腦屏障有作用，對炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生的影響，可望為臨床腦復(fù)蘇治療提供一種新的思路。　　第一部分　氣管夾閉窒息法大鼠心肺復(fù)蘇模型的建立研究　　目的：通過建立氣管夾閉窒息

2、法大鼠心肺復(fù)蘇模型，觀察該模型操作的復(fù)蘇效果，探討其在復(fù)蘇后腦的缺血-再灌注損傷中的研究價(jià)值。 材料與方法: 選用SD雄性大鼠25只，誘導(dǎo)麻醉后，進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)、經(jīng)皮血氧飽和度監(jiān)測、有創(chuàng)動脈壓監(jiān)測、動物呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣。于呼氣末夾閉氣管插管致呼吸停止，導(dǎo)致大鼠心跳驟停，后進(jìn)行心肺復(fù)蘇，并觀察大鼠心電圖、頸動脈平均動脈壓(mean artery pressure，MAP)、動脈血?dú)獾鹊淖兓?結(jié)論: 本實(shí)驗(yàn)

3、在參考了國外相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，成功建立了窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型，模型基本穩(wěn)定。 在制作窒息法心肺復(fù)蘇時，通過血壓、HR、血?dú)獾鹊膭討B(tài)監(jiān)測，及時進(jìn)行心肺復(fù)蘇，適當(dāng)應(yīng)用腎上腺素和補(bǔ)堿治療，可提高大鼠心肺復(fù)蘇模型成功率。 氣管夾閉法大鼠窒息心肺復(fù)蘇模型制作設(shè)備簡單，成本低，操作容易，模型制作成功率高，復(fù)蘇后心率、血壓很快恢復(fù)至心臟驟停前水平，適用于因缺氧引起的心搏驟停所致的腦缺血-再灌注損傷的研究。 第二部分　基質(zhì)金屬蛋

4、白酶9(MMP9)功能阻斷對腦復(fù)蘇大鼠腦組織MMP9的表達(dá)和血腦屏障的影響研究　　目的：腦復(fù)蘇目前已經(jīng)成為CPCR研究的主要難點(diǎn)和研究熱點(diǎn)之一。本研究通過使用SB-3CT阻斷CPCR早期大鼠腦組織MMP9的表達(dá)和活性，觀察腦組織MMP9的表達(dá)和活性的變化，以及其對血腦屏障的作用，研究其在復(fù)蘇后腦的缺血-再灌注損傷中的治療價(jià)值。 材料與方法: 將動物分為3組，假手術(shù)對照組、復(fù)蘇治療組和復(fù)蘇對照組，每組40只，共120只。

5、在即刻及3、9、24h和48h時間點(diǎn)分5個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)8只動物處死并取樣。 在不同時間點(diǎn)處死大鼠后，取樣，測定腦組織基質(zhì)金屬蛋白酶9蛋白的表達(dá)和檢測腦組織基質(zhì)金屬蛋白酶9mRNA。并觀察腦含水量、腦組織伊文思藍(lán)含量和使用電鏡觀察腦組織的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)論: 1、在心肺復(fù)蘇大鼠腦缺血模型中MMP9蛋白和MMP9mPRNA的表達(dá)明顯升高，24h達(dá)高峰；腦組織的腦含水量和伊文思藍(lán)含量明顯升高，血腦屏障受到破壞，24

6、h達(dá)高峰。電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察證實(shí)腦組織損傷明顯， 24h達(dá)高峰。 2、在心肺復(fù)蘇大鼠腦缺血模型中應(yīng)用特異性基質(zhì)金屬蛋白酶9抑制劑SB-3CT能明顯減少M(fèi)MP9的表達(dá)，明顯減輕腦水腫，對心肺復(fù)蘇后腦缺血-再灌注損傷有明顯保護(hù)作用。 第三部分　基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)功能阻斷對腦復(fù)蘇大鼠腦組織炎癥反應(yīng)的影響研究　　目的：炎癥反應(yīng)在心肺復(fù)蘇后腦缺血-再灌注損傷中起著重要的作用。本研究通過使用SB-3CT阻斷CPCR早期大鼠

7、腦組織MMP9的表達(dá)和活性，使腦組織MMP9的表達(dá)和活性明顯降低，以觀察其對炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生的作用，探討其在復(fù)蘇后腦的缺血-再灌注損傷中的應(yīng)用價(jià)值。材料與方法將動物分為3組，假手術(shù)對照組、復(fù)蘇治療組和復(fù)蘇對照組，每組40只，共120只。在即刻及3、9、24h和48h時間點(diǎn)分5個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)8只動物處死并取樣。 在不同時間點(diǎn)處死大鼠后，取樣，采用雙抗體夾心ELISA，檢測腦組織上清液TNF-α、IL-1和IL-6的含量。