基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的篩選研究.pdf

1、[目的]從4種候選的藥物中初步篩選出抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)表達(dá)和活性的藥物，為進(jìn)一步復(fù)篩和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用研究打下基礎(chǔ)。 [方法]體外培養(yǎng)高轉(zhuǎn)移性B16黑色素瘤細(xì)胞(正常內(nèi)皮細(xì)胞作為平行對(duì)照)，加不同濃度的待檢藥物，利用MTT方法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，用ELISA方法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-2分泌量的影響，同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，再用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)

2、藥物對(duì)細(xì)胞內(nèi)的MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)的影響，使用明膠酶譜法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-2的活性，通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞MMP-2mRNA的表達(dá)的作用。 [結(jié)果]MTT法檢測(cè)顯示：3種濃度的利凡諾在72小時(shí)內(nèi)對(duì)B16細(xì)胞都有明顯抑制，與同時(shí)段對(duì)照組相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；抑制率最高達(dá)63.04％；4種濃度的康復(fù)新在72小時(shí)內(nèi)對(duì)細(xì)胞都有微弱的抑制，與同時(shí)段對(duì)照組相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；

3、不同濃度的B110和G210藥物血清對(duì)B16細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制作用，并且在實(shí)驗(yàn)的最初24小時(shí)是抑制作用表現(xiàn)最明顯的時(shí)間段。ELISA法檢測(cè)顯示：利凡諾、康復(fù)新使B16細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-2蛋白的相對(duì)含量均降低，但是康復(fù)新作用較弱；B110和G210藥物血清亦降低培養(yǎng)上清中MMP-2蛋白的相對(duì)含量，且在實(shí)驗(yàn)的最初24小時(shí)也是作用最明顯的時(shí)段。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)：利凡諾作用后，B16黑色素瘤細(xì)胞出現(xiàn)分化成熟的形態(tài)學(xué)改變，但對(duì)正常細(xì)胞的形態(tài)卻沒(méi)

4、有明顯的影響，其它藥物無(wú)類似效應(yīng)。免疫細(xì)胞化學(xué)方法查見(jiàn)：利凡諾降低細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)。明膠酶譜法檢測(cè)顯示：在等體積的細(xì)胞上清檢測(cè)時(shí)伴隨著藥物濃度的增加，MMP-2的蛋白活性漸漸減弱；等細(xì)胞數(shù)的相應(yīng)培養(yǎng)上清檢測(cè)MMP-2的蛋白活性未表現(xiàn)出類似趨勢(shì)。RT-PCR檢測(cè)顯示：在利凡諾的作用下，伴隨著藥物濃度的升高，MMP-2mRNA表達(dá)逐漸降低。 [結(jié)論]幾種藥物均有抑制MMP-2表達(dá)作用，但利凡諾作用最明顯。利凡諾對(duì)