基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑對小鼠急性移植物抗宿主病的療效研究.pdf

1、目的：同種異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic-hemapoieticstemcelltransplantation，Allo-HSCT)是血液系統(tǒng)惡性疾病的有效治療方法。由于個體間存在著免疫屏障，HVG(宿主抗移植物)和GVH(移植物抗宿主)是異基因造血干細(xì)胞移植(Allo-HSCT)最重要的生物學(xué)反應(yīng)，移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host-Disease，GVHD)是移植后主要的致死性并發(fā)癥。近年來造血干細(xì)胞移植

2、(HSCT)的成功率逐步提高，但是移植物抗宿主病(GVHD)仍然是移植后死亡的主要原因[1,2]。基質(zhì)金屬蛋白酶(MatrixMetalloproteinases，MMPs)是一類分解細(xì)胞外基質(zhì)組分的鋅蛋白酶，它們在有機體生長發(fā)育中的細(xì)胞外基質(zhì)逆轉(zhuǎn)與重塑以及疾病的病理損害中起著極為重要的作用?；|(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(MatrixMetalloproteinasesinhibitor，MMPI)能夠拮抗MMP的作用。本實驗的目的就是驗證MM

3、PI對小鼠骨髓移植后急性GVHD(aGVHD)的預(yù)防作用。 材料與方法：15只近交系C57BL/6(H-2b)小鼠作為異基因供鼠，45只BALB/C(H-2d)小鼠為受鼠。在無菌環(huán)境下取C57BL/6(H-2b)小鼠骨髓和脾臟，制備成單個核細(xì)胞懸液，以骨髓細(xì)胞1×107/只和脾有核細(xì)胞5×106/只注入受鼠體內(nèi)。將受鼠隨機分為A、B、C三組，每組15只。注射前經(jīng)10Gy的60Coγ射線全身照射(劑量10Gy，20-30min)。

4、A組為MMPI組，經(jīng)尾靜脈移植入上述C57BL/6(H-2b)小鼠的骨髓細(xì)胞和脾有核細(xì)胞細(xì)胞，在移植后第0～14天腹腔內(nèi)注射MMPI2mg/只/天；B組為環(huán)孢素A(CyclosporineA，CsA)組，在移植后1～14天腹腔內(nèi)注射CsA5mg/kg/只/天；C組為對照組，在移植后1～14天腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.2ml/只/天。移植后，常規(guī)計數(shù)外周血細(xì)胞變化；測定A、B、C三組小鼠血清TNF-α的水平；比較三組小鼠GVHD的一般反應(yīng)和肝

5、、脾、小腸的病理學(xué)變化；解剖鏡下比較三組脾結(jié)節(jié)數(shù)量；觀察小鼠的存活時間。 結(jié)果：1.外周血白細(xì)胞變化：A、B、C三組小鼠外周血白細(xì)胞于移植后第12天均降至最低。A、B兩組小鼠第14天白細(xì)胞開始上升，C組白細(xì)胞上升緩慢。第14天，A組白細(xì)胞低于B組，但是兩組相比無顯著性差異(P＞0.05)。A，B組小鼠與C組小鼠相比有顯著差異(P＜0.05)。 2.三組小鼠外周血血小板的變化：A、B、C三組小鼠外周血血小板于移植后第12天

6、均降至最低。三組小鼠外周血血小板于移植后第14天開始上升，移植后第14天，A、B組小鼠與C組小鼠相比差異有顯著性(P＜0.05)A組小鼠與B組小鼠相比差異無顯著性(P＞0.05)。 3.移植后第7天小鼠血清TNF-α的水平：移植后第7天小鼠出現(xiàn)明顯的aGVHD反應(yīng)。C組小鼠的血清TNF-α的水平明顯升高，B組小鼠血清TNF-α的水平也上升，A組小鼠血清中測不到TNF-α。 4.GVHD的一般反應(yīng)和肝、小腸的病理學(xué)變化：A

7、組小鼠第7天出現(xiàn)明顯GVHD反應(yīng)，第12～14天達到死亡高峰；B組第7天出現(xiàn)明顯GVHD反應(yīng)，第13～16天達到死亡高峰；C組第5天出現(xiàn)明顯GVHD反應(yīng)，第9～10天達到死亡高峰。A組和B組小鼠急性GVHD的臨床癥狀如脫毛、少動和體重下降均較C組輕。病理顯示，A組與B組GVHD反應(yīng)較C組輕，C組小鼠的肝臟中有大量單核細(xì)胞浸潤及在實質(zhì)中觀察到有纖維組織，A組和B組小鼠的炎癥改變局限于門靜脈周圍。C組小鼠的腸道改變?yōu)槟[脹，絨毛變平及隱窩抬高

8、，而在A組和B組小鼠中觀察不到這些改變。C組小鼠的脾臟改變?yōu)榱馨臀s和結(jié)構(gòu)異常，在A組和B組小鼠中這些改變很輕微。A組GVHD反應(yīng)與B組無顯著差別。 5.脾結(jié)節(jié)計數(shù)：移植后第14天、21天，A、B、C組脾結(jié)節(jié)數(shù)分別為：56.1±4.3，64.3±11.2，36.6±6.4；76.4±10.4，81.5±5.8，42.3±7.7。A、B兩組平均值均高于C組，具有顯著性差異(P＜0.05)，A組與B組之間無顯著性差異(P＞0.05)

9、。 6.平均生存期：A、B、C組小鼠中位生存期分別為17.33±1.91、18.33±1.10、7.0±0.87天，A組和B組小鼠平均生存期平均較C組延長6天和9天。A組小鼠與C組小鼠的生存期比較有顯著性差異(P＜0.05)，A、B兩組生存期無明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論：1.MMPI能夠有效地預(yù)防和減輕aGVHD反應(yīng)，單獨應(yīng)用MMPI預(yù)防aGVHD的效果與CsA效果相當(dāng)。 2.MMPI對aGVHD的治療作用