抑瘤寧有效成分對腫瘤細胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文抑瘤寧有效成分對腫瘤細胞增殖抑制作用的研究姓名：朱利楠申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：樊青霞;王瑞林20070526鄭州人擎2 0 0 7 屆碩E 學位論文 抑瘃寧有效成分對腫疬卸i 胞增巰抑制作用的研究前仍屬空白。本實驗從D u e 中提取出D u c h e s i d e ，經(jīng)鑒定為D u e 活性成分之一。分別以A 、B 、C 、D 代表O r i d o n i n 、A S S 、S o l a

2、n i n e 、D u c h e s i d e 四種藥物，采用四種藥物分別單用和以A 為主要成分，與B 、c 、D 進行二聯(lián)、三聯(lián)、四聯(lián)組合，作用于人乳腺癌M D A —M B ．2 3 1 細胞、人肺癌A 5 4 9 細胞、人肺癌N C I ．H 5 2 0 細胞、人宮頸癌H e l a 細胞，進行體外抗腫瘤研究，探討中藥成分或單體的作用機理。并根據(jù)細胞毒性最大，藥物劑量最小的原則從多次實驗中篩選出最佳藥物組合及最佳配伍劑量，為

3、進一步研究抑瘤寧成分的藥理學毒性及開發(fā)新藥提供實驗基礎。方法1 ．實驗分組。本實驗分為1 1 組，分別為A 、B 、C 、D 、A + B 、A + C 、A + D 、A + B + C 、A + B + D 、A + C + D 、A + B + C 十D ，同時設空白對照組( 未加藥組) 。2 ．采用噻唑藍( M T T ) 還原法測定各實驗組對M D A ．M B ．2 3 1 、A 5 4 9 、N C I ．H 5 2 0

4、、H e l a 細胞的生長抑制率。取對數(shù)生長期細胞，接種于9 6 孑L 板，培養(yǎng)2 4 h 后，將不同濃度的各組藥物分別作用于M D A ．M B ．2 3 1 、A 5 4 9 、N C I —H 5 2 0 、H e l a 細胞繼續(xù)培養(yǎng)4 8 h 后，測定各組細胞生長抑制率。每個濃度設6 個平行孔，重復三次。3 ．倒置顯微鏡觀察各組藥物作用于M D A ．M B ．2 3 1 細胞4 8 h 后的形態(tài)學變化。4 ．流式細胞儀檢測

5、各組藥物作用后M D A —M B ．2 3 1 細胞周期分布和凋亡率。5 ．統(tǒng)計學分析。采用統(tǒng)計軟件S P S S l l ．0 分析，用獨立樣本的t 檢驗，Z 2檢驗對統(tǒng)計數(shù)據(jù)進行分析，如有差異，多組問參數(shù)兩兩比較采用q 檢驗。以c t = 0 ．0 5為檢驗水準。結果1 ．不同濃度不同藥物分組的四種藥物作用于體外培養(yǎng)的M D A —M B 一2 3 l 、A 5 4 9 、N C I —H 5 2 0 、H e l a 細胞4 8

6、 h 后，各實驗組生長抑制率結果如下：1 ．1 M D A —M B - 2 3 1 細胞：A 在單藥組抑制作用最強( I C s o = 4 ．7 8 9 9 ／m 1 ) ，C 次之( I C 5 0 = 1 ．1 5 m g ／m 1 ) ，B 最弱( I C 5 0 = 2 ．1 5 m g ／m 1 ) 。四藥聯(lián)合在聯(lián)合用藥組各成分劑量最小( A 2 I ．t g ／m + B 0 ．6 m g ／m l + C 0 ．4 m