抑瘤寧體外對(duì)非消化系統(tǒng)癌細(xì)胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、目的 本課題在前期實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)之上以人乳腺癌MDA-MB-231、人肺癌NCI-H520、人肺癌A549、人宮頸癌Hela四種細(xì)胞為觀察對(duì)象，通過(guò)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，生長(zhǎng)抑制率測(cè)定及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡率進(jìn)一步探討抑瘤寧對(duì)非消化系統(tǒng)癌細(xì)胞的增殖抑制作用，最佳方劑組成及用藥劑量，為臨床應(yīng)用抑瘤寧治療非消化系統(tǒng)實(shí)體瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1、藥物的制備按照相關(guān)文獻(xiàn)提取方法提取各成分的粗提物。實(shí)驗(yàn)中用培養(yǎng)液將粗

2、提物稀釋成不同濃度。藥物濃度=草藥重量/培養(yǎng)液體積。 2、細(xì)胞培養(yǎng)將MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela細(xì)胞分別接種于含體積分?jǐn)?shù)10％滅活胎牛血清的L15、RPMI-1640、F12、高糖DMEM培養(yǎng)液中。在37℃、體積分?jǐn)?shù)5％CO<,2>、相對(duì)濕度為體積分?jǐn)?shù)95％的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。1～2d換液一次，1～2d或2～3d傳代。 3、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的測(cè)定取MDA-MB-231、NCI-H520、A

3、549、Hela對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，分別以1×10<'5>/ml、5x10<'4>/ml、5x10<'4>/ml、5x10<'4>/ml細(xì)胞濃度接種于96孔板上，每孔200μ l，培養(yǎng)24h后，以抑瘤寧不同藥物搭配處理細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，每組6個(gè)平行孔，設(shè)調(diào)零孔，空白對(duì)照孔和本底對(duì)照孔，置37℃、5％CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，采用噻唑藍(lán)(MTT)還原法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次(n=18)。 4、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察倒置顯

4、微鏡下觀察比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在細(xì)胞形態(tài)學(xué)區(qū)別。 5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡率6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10．0，采用單因素方差分析及x<'2>檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1、抑瘤寧對(duì)四種非消化系統(tǒng)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 1．1對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Due(0．4mg/ml)+Sol(0．4mg/ml)+Aca(0．4mg/m

5、l)”四藥聯(lián)用時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達(dá)99．74％。 1．2對(duì)NCI-H520細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Duc(1mg/ml)+Sol(1mg/ml)+Aca(1mg/ml)”四藥聯(lián)用時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達(dá)96．41％。 1．3對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用以“Rab(3mg/ml)+Duc(0．8mg/ml)+Sol(O．8mg/ml)+Aca(0．8mg

6、/ml)”四藥聯(lián)用時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達(dá)80．62％。 1．4對(duì)Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用以“Rab(2mg/ml)+Due(1mg/ml)+Sol(1mg/ml)+Aca(1mg/ml)”四藥聯(lián)用時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，用藥劑量最少，抑制率可達(dá)97．98％。 2、對(duì)照組：MDA-MB-231細(xì)胞呈梭形，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞透亮，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。四藥聯(lián)用組：細(xì)胞相互分離，貼壁大量減少，細(xì)胞皺縮，體積縮小，可

7、見(jiàn)大量細(xì)胞崩解碎片，死亡。 3、抑瘤寧作用于體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞后，四藥聯(lián)用組s期細(xì)胞百分率明顯升高；G<,0>/G<,1>期細(xì)胞百分比明顯下降；細(xì)胞被阻滯于S期；細(xì)胞凋亡率升高。與空白對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 結(jié)論 1、Rab、Duc、Sol、Aca四藥聯(lián)用能明顯地抑制MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)。 2、Rab、Due、Sol、