抑瘤寧對(duì)消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞體外增殖抑制作用的研究.pdf

1、目的： 惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康及生命的常見病，也是世界醫(yī)學(xué)的一大難題。目前，主要采用手術(shù)、放療、化療及生物治療等綜合措施。對(duì)于中晚期惡性腫瘤患者，作為其主要治療手段的化療，雖然療效肯定，但是由于其毒副作用大、價(jià)格昂貴，且存在多藥耐藥等問題，常導(dǎo)致病人機(jī)體狀況的惡化及生命質(zhì)量的降低，嚴(yán)重時(shí)致患者因不能耐受而放棄治療。而中藥尤其是中藥復(fù)方治療腫瘤從整體考慮，具有藥源廣泛、價(jià)格低廉、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。中藥化學(xué)通過對(duì)單味中藥或復(fù)方中

2、藥進(jìn)行提取、分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定，尋找藥物活性成分，是獲得新的抗癌藥物的重要途徑，也正在成為抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。 抑瘤寧為純中藥復(fù)方制劑，由Rab、Aca、Sol、Due組成，臨床用于治療消化系統(tǒng)腫瘤，療效肯定，無明顯毒副作用。根據(jù)本課題組前期對(duì)四味中藥粗提物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，Rab與Due兩藥聯(lián)用和Rab、Aca、Sol、Due四藥聯(lián)用體外能明顯地抑制消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)；四藥聯(lián)用時(shí)，能使Eca-109細(xì)胞阻滯于S期，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋

3、亡。迄今尚未對(duì)其有效抗腫瘤成分進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，方劑組成及用藥劑量尚待通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)選。本實(shí)驗(yàn)以人食管癌Eca-109、人胃癌BGC-823、人肝癌Bel-7402、人結(jié)腸癌Ls-174t細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，通過文獻(xiàn)查閱，從Rab中選取成分A-Oridonin，Aca中選取成分B-ASS(Acanthopanax Senticosus')，Sol中選取成分C-Solanine，Due中選取成分D-Ducheside，以A

4、為主要成分，與B、C、D進(jìn)行兩聯(lián)、三聯(lián)、四聯(lián)等組合，根據(jù)細(xì)胞毒性最大、藥物劑量最小的原則從中篩選出最佳的藥物組合。 方法： 1．MTT法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組對(duì)Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，接種于96孔板上培養(yǎng)24h后，設(shè)空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行孔重復(fù)三次，分別作用于Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t細(xì)胞48h，測(cè)定

5、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。 2．用倒置顯微鏡觀察藥物作用于Eca．109細(xì)胞48h后的形態(tài)學(xué)變化。 3．用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Eca-109細(xì)胞周期分布和凋亡率。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10．0，采用單因素方差分析及x<'2>檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1．對(duì)Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。 1．1對(duì)Eca-109

6、細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。以兩藥聯(lián)用“A(10μg/mL)+B(1mg/mL)”，三藥聯(lián)用“A(15μg/mL)+B(1mg/mL)+C(0．4mg/mL)”、“A(10μg/mL)+B(1mg/mL)+D(3．2mg/mL)”，四藥聯(lián)用“A(10μg/mL)+B(0．5mg/mL)+C(0．4mg/mL)+D(1．6mg/mL)”時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，可達(dá)100％。 1．2對(duì)BGC-823細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。以兩藥聯(lián)用“A(201μ

7、g/mL)+B(1mg/mL)”，三藥聯(lián)用“A(20μg/mL)+B(1mg/mL)+C(0．8mg/mL)”、“A(30μg/mL)+B(1mg/mL)+D(3．2mg/mL)”，四藥聯(lián)用“A(15μg/mL)+B(0．75mg/mL)+C(0．4mg/mL)+D(3．2mg/mL)”時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，可達(dá)100％。 1．3對(duì)Bel-7402細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。兩藥聯(lián)用以“A(15μg/mL)+B(2mg/mL)”抑制率最

8、高，為90．80％；三藥聯(lián)用以“A(30μg/mL)+B(1mg/mL)+C(1．6mg/mL)”抑制率最高，為76．31％；四藥聯(lián)用以“A(20μg/mL)+B(1mg/mL)+C(0．4mg/mL)+D(3．2mg/mL)”時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，可達(dá)94．23％。 1．4對(duì)Ls-174t細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。兩藥聯(lián)用以“A(301μg/mL)+B(1mg/mL)”抑制率最高，為31．46％；三藥聯(lián)用以“A(20μg/mL)+B

9、(1mg/mL)+c(0．8mg／mL)”抑制率最高，為28．76％；四藥聯(lián)用以“A(20μg/mL)+B(1mg/mL)+C(0．8mg/mL)+D(1．6mg/mL)”時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率最高，可達(dá)36．54％。 2．用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Eea-109細(xì)胞周期分布和凋亡率。 各實(shí)驗(yàn)組作用于細(xì)胞48h后，s期細(xì)胞百分率明顯升高，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞百分率明顯下降。呈現(xiàn)凋亡所特有的亞G<,1>，凋亡率升高，與空白對(duì)照組相