AD-ING4-OSM對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞體外抑制作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究腺病毒載體介導(dǎo)的雙基因共表達(dá)（Ad-ING4-OSM）對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞體外抑制作用及機(jī)制。
　　方法：將基因重組腺病毒載體反復(fù)感染HEK293t細(xì)胞，經(jīng)反復(fù)擴(kuò)增取病毒上清冷凍備用；利用不同劑量攜帶有綠色熒光蛋白(GFP)的空腺病毒載體（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2細(xì)胞確定最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)；RT-PCR檢測外源性ING4和OSM基因的轉(zhuǎn)錄；PI單染流式細(xì)胞儀（FCM）檢測各實(shí)驗(yàn)組鼻咽癌CNE-2細(xì)胞凋亡效

2、應(yīng)；MTT檢測各實(shí)驗(yàn)組鼻咽癌CNE-2細(xì)胞生長抑制效應(yīng)；Hoechst33285核染色觀察各實(shí)驗(yàn)組鼻咽癌CNE-2細(xì)胞凋亡核形態(tài)學(xué)改變；RT-PCR檢測分析鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因P53、P27、P21、Survivin的表達(dá)。
　　結(jié)果：經(jīng)反復(fù)感染HEK293t細(xì)胞后，獲得病毒滴度約為1.3~2.7×109pfu/ml；腺病毒載體（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2細(xì)胞最佳感染復(fù)數(shù)為100MOI；RT-PCR

3、檢測確定腺病毒介導(dǎo)的ING4和OSM基因可在鼻咽癌CNE-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，且在對(duì)照組和空白組未檢測出內(nèi)源性ING4和OSM基因轉(zhuǎn)錄；PI單染流式細(xì)胞儀（FCM）檢測鼻咽癌CNE-2細(xì)胞凋亡效應(yīng)，雙基因共表達(dá)（Ad-ING4-OSM）組明顯明顯高于單基因Ad-ING4組和Ad-OSM組（P＜0.05），單基因組之間無明顯差異，但優(yōu)于空白組和空病毒組(P＜0.05)，空白組和空病毒組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；MTT檢測發(fā)現(xiàn)雙基因共表達(dá)（

4、Ad-ING4-OSM）組鼻咽癌CNE-2細(xì)胞生長抑制效應(yīng)明顯優(yōu)于單基因ING4組和OSM組（P＜0.05），單基因組之間無明顯差異(p>0.05)，但優(yōu)于空白組和空病毒組(P＜0.05)；Hoechst33285核染色觀察到雙基因共表達(dá)（Ad-ING4-OSM）組鼻咽癌CNE-2細(xì)胞中細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀藍(lán)色熒光及明顯核形態(tài)變化；RT-PCR檢測分析顯示Ad-ING4-OSM雙基因共表達(dá)可明顯上調(diào)P53、P27、P2