Ad-OSM對(duì)鼻咽癌抑癌效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我國(guó)南方、越南、菲律賓等其它南亞國(guó)家高發(fā)腫瘤之一，廣東、廣西、福建、湖南等省為國(guó)內(nèi)高發(fā)區(qū)，部分地區(qū)高達(dá)30/10萬(wàn)～50/10萬(wàn)，調(diào)整死亡率分別為6.47/10萬(wàn)、4.92/10萬(wàn)、3.28/10萬(wàn)、3.22/10萬(wàn)，亦居世界首位（調(diào)整死亡率2.88/10萬(wàn)）。男性發(fā)病率約為女性的2～3倍,40～50歲為高發(fā)年齡組。鼻咽癌的發(fā)病率和死亡率均

2、隨年齡增長(zhǎng)而上升。鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素作用、多基因參與、多階段病變發(fā)生的極其復(fù)雜的癌變過(guò)程，基因治療作為一種高效性、特異性、靶向性的治療手段已是醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，抑瘤M(OncostatinM，OSM)基因?qū)δ[瘤細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用和靶向誘導(dǎo)凋亡的功能。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)擬采用以腺病毒為載體的OSM基因，觀察其對(duì)該鼻咽癌細(xì)胞及裸鼠移植瘤的抑癌效應(yīng)，并對(duì)其可能機(jī)理進(jìn)行了探討，為將來(lái)運(yùn)用Ad-OSM應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、
　　 方法：
　　 體外：將Ad-OSM體外感染CNE-2Z鼻咽癌細(xì)胞，運(yùn)用RT-PCR及Westernblot檢測(cè)OSM基因在CNE-2Z細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)；MTT法和Annexin-V-PE/7-AAD雙染色的FCM檢測(cè)PBS、Ad-GFP、Ad-OSM體外抑制鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的抑癌增效效應(yīng)；PI染色的FCM檢測(cè)Ad-OSM對(duì)鼻咽癌細(xì)胞周期的影響；運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)P21、P27、Bcl-2、Surviv

4、in等以分析Ad-OSM誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可能的分子機(jī)制；Westernblot檢測(cè)Ad-OSM對(duì)CNE-2Z細(xì)胞中cleavedCaspase-3的表達(dá)的影響。體內(nèi)：用CNE-2Z細(xì)胞構(gòu)建裸鼠移植瘤，在鼻咽癌的裸鼠移植瘤動(dòng)物模型上，運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)CNE-2Z鼻咽癌移植瘤生長(zhǎng)相關(guān)因子的表達(dá)：(1)P21、P53、Bax、Caspase-3、等促凋亡因子；(2)Bcl-2、Cox-2等凋亡抑制因子。
　　 結(jié)果：
　　

5、 RT-PCR和Westernblot檢測(cè)證實(shí)腺病毒介導(dǎo)的OSM基因可以在CNE-2Z細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄及表達(dá)；Ad-OSM體外能明顯抑制CNE-2Z鼻咽癌癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，引起G1期阻滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P＜0.05)。體內(nèi)也能明顯抑制CNE-2Z裸鼠鼻咽癌移植瘤的生長(zhǎng)。分子機(jī)制檢測(cè)結(jié)果表明：Ad-OSM能明顯上調(diào)CNE-2Z鼻咽癌細(xì)胞P21、P27、P53、Bax、Caspase-3和下調(diào)Cox-2、Bcl-2、Survivin等細(xì)胞周期和凋