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文檔簡介
1、目的:旨在探索豆類絲核菌菌絲體及其次級代謝產(chǎn)物的成分,分析其各成分的用途,為開拓豆類絲核菌的新用途奠定理論基礎。 方法:1.定期用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)移接豆類絲核菌,使之保持旺盛的生長力。2.將特定的豆類絲核菌菌株用改良的Czapek's培養(yǎng)基進行培養(yǎng),獲得豆類絲核菌培養(yǎng)液和豆類絲核菌菌絲體。3.用不同的方法對菌絲體和次級代謝產(chǎn)物分別進行處理。①對豆類絲核菌菌絲體的處理:將自然干燥的豆類絲核菌菌絲體用0.5%的鹽酸進
2、行浸泡24h后應用40KHz超聲波清洗器在70℃處理30min,收集提取液,如此重復三次,合并提取液。將提取液在60℃條件下減壓濃縮,備用。用2mol/L鹽酸調(diào)提取液為pH2,加入新鮮配制的雷氏鹽飽和水溶液,有沉淀生成,濾集生成的沉淀,并將沉淀溶于丙酮,濾除不溶物,向丙酮溶液中加入硫酸銀飽和水溶液,使沉淀分解。過濾后向濾液中加入一定量氯化鋇溶液,過濾,濾液用2mol/L氨水將之調(diào)pH10,揮干得到褐色粘稠狀帶有特異性香味的物質。將其在9
3、0℃下減壓升華得到白色晶體。②對豆類絲核菌培養(yǎng)液的處理:方法一,取1000ml預處理完備的豆類絲核菌培養(yǎng)液,在60℃減壓濃縮,濃縮液調(diào)pH2,用正丁醇萃取10次,得到有機相和酸水液。將酸水液調(diào)至pH10,再用正丁醇萃取10次得到水相和有機相。有機相用0.2mol/L的稀硫酸萃取,得到水相和有機相。將水相用濃氨水堿化后濃縮至干,所得浸膏減壓升華得到白色粉末狀物質。方法二,取1000ml預處理完備的豆類絲核菌培養(yǎng)液,調(diào)pH10,用H2O∶C
4、H2Cl2(3∶1,v/v)萃取,棄去CH2Cl2層,將水層調(diào)pH10后,再用H2O∶CH2Cl2(3∶1,v/v)萃取,棄去CH2Cl2層,將水層調(diào)pH7,濃縮后上732型強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂,先用去離子水沖洗,后用1mol/LNH4OH洗脫,收集氨洗液,調(diào)pH7,濃縮后凍干,得到淺黃色粉末,將之減壓升華得到白色粉末狀物質。方法三,取1000ml預處理完備的豆類絲核菌培養(yǎng)液,調(diào)pH7,上大孔吸附樹脂,反復富集5次,靜置12h,
5、用滴水沖洗,洗2個柱體積,收集水洗脫液,再用乙醇洗脫,收集約2個柱體積的醇水混合洗脫液,最后收集2個柱體積的醇洗脫液,分別減壓濃縮各洗脫段的液體,經(jīng)TLC檢測,合并醇洗液,減壓回收乙醇,余液凍干,得到褐色粉末。TLC則可檢出,與標準品對照,均呈現(xiàn)淡紫色,但由于純度較差難以升華。 結果:經(jīng)過熔點測定儀和GC-MS檢測,初步鑒定豆類絲核菌菌絲體中可能含有蒲公英甾醇、α-香樹脂醇、大狼毒素以及兩種未知的化合物。這幾種物質均是首次從豆類
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