基于Ⅰ型PKS基因的海蘆筍內(nèi)生真菌的分離鑒定及其次級(jí)代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、Ⅰ型聚酮合成酶（Polyketide synthasesⅠ，PKSⅠ）是調(diào)節(jié)微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物聚酮類(lèi)化合物的關(guān)鍵酶，它催化合成許多具有抑菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性的化合物。因此，通過(guò)PKSⅠ基因序列分析來(lái)預(yù)測(cè)微生物產(chǎn)生的化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)型，成為研究?jī)?nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的新型策略。利用“基因-酶-化合物”的對(duì)應(yīng)關(guān)系，目標(biāo)直接指向產(chǎn)生聚酮化合物的合成基因，大大提高發(fā)現(xiàn)聚酮化合物的效率。
　　本研究以野生海蘆筍為原料，采用表面消毒、PDA

2、平板分離純化得到內(nèi)生真菌，通過(guò)PCR擴(kuò)增篩選出四株含有Ⅰ型PKS基因的菌株，編號(hào)分別為Salicorn1、Salicorn2、Salicorn3、Salicorn4;通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析，表明這些菌株可能具有產(chǎn)生聚酮類(lèi)化合物的潛力。利用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法將四株菌株分別鑒定為:鏈格孢菌(Alternaria alternata)、黃曲霉(Aspergillus flavus)、圓弧青霉(Penicillium cyclopium

3、)、雜色曲霉（Aspergillus versicolor）。
　　對(duì)菌株Salicorn1～Salicorn4分別進(jìn)行靜態(tài)發(fā)酵，將所得發(fā)酵液混合，通過(guò)溶劑分離萃取、濃縮蒸干、柱層析分離純化從發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到了四個(gè)純化合物;利用核磁共振（1HNMR，13C NMR，HMBC，HMQC，1H-1H COSY）、質(zhì)譜MS等現(xiàn)代波譜技術(shù)，鑒定這些化合物結(jié)構(gòu)分別是:1，5，9-trihydroxy-3，7-dimethylanthrac