懷山藥內(nèi)生菌的分離及其次生代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌（plant entophyte）是指那些生活史的某一段時(shí)期生活在植物組織內(nèi)，對(duì)植物沒有引起明顯的病害癥狀的一類微生物。內(nèi)生菌主要為內(nèi)生細(xì)菌、真菌和放線菌。現(xiàn)代研究已表明，植物內(nèi)生菌是道地藥材形成的途徑之一。懷山藥(Dioscorea oppositeThunb.)為薯蕷科多年生植物薯蕷的塊根，是“四大懷藥”之一，為河南著名道地藥材。目前有關(guān)懷山藥內(nèi)生菌報(bào)道幾乎空白，為了更好的了解和利用懷山藥內(nèi)生菌資源，本研究對(duì)懷山藥內(nèi)生菌的

2、類群分布進(jìn)行了初步探究，進(jìn)而選取一種優(yōu)勢(shì)內(nèi)生菌，研究其次生代謝產(chǎn)物。
　　本實(shí)驗(yàn)以懷山藥為材料，采用組織塊分離法和研磨分離法從懷山藥的根中共分離得到41株內(nèi)生菌。其中18株細(xì)菌，經(jīng)鑒定為8個(gè)屬，分別為芽孢桿菌屬(Bacillus)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、硫胺素芽孢桿菌屬(Aneurinibacillus)、土壤桿菌屬(Agrobacterium)、勒克菌屬(Leclercia)、金黃桿菌屬(Chryseoba

3、cterium)、棒桿菌屬(Leifsonia)和鏈霉菌屬(Streptomyces)；另有23株真菌，經(jīng)鑒定為6個(gè)屬，分別為鐮孢菌屬(Fusarium)、青霉屬(Penicillium)、曲霉屬(Aspergillus)、地霉菌屬(Geotrichum)、彎孢菌屬(Curvularia)和鏈格孢屬(Alternaria)。其中芽孢桿菌屬細(xì)菌和鐮孢菌屬真菌為優(yōu)勢(shì)菌群。
　　本研究通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定和分子鑒定，確定優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌 Doef

4、-1菌株為厚孢鐮刀菌(Fusarium chlamydosporum)，對(duì)其液體發(fā)酵產(chǎn)物的甲醇提取物和乙酸乙酯提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究。采用硅膠柱層析進(jìn)行初步分離，進(jìn)一步結(jié)合Sephadex LH-20，MCI等常壓色譜材料和制備型 HPLC分離得到8個(gè)單體化合物。利用質(zhì)譜、核磁共振等波譜技術(shù)對(duì)單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，分別為過(guò)氧麥角甾醇(1)、麥角甾-4,22-二烯-3-酮(2)、鄰苯二甲酸二丁酯(3)、鄰苯二甲酸二異丁酯(4)、煙酸