細(xì)胞毒活性的紅樹林內(nèi)生真菌的分離篩選及其次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、紅樹林內(nèi)生真菌生存環(huán)境特殊復(fù)雜，其次級(jí)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎、種類繁多，是新結(jié)構(gòu)活性化合物的重要來源。為了尋找結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物，本論文采用化學(xué)與生物學(xué)相集成的篩選方法，開展了紅樹林內(nèi)生真菌的分離、細(xì)胞毒活性篩選及2株紅樹林內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物的研究工作。內(nèi)容包括：紅樹林內(nèi)生真菌的分離與細(xì)胞毒活性菌株的篩選；發(fā)酵菌株發(fā)酵條件的摸索及細(xì)胞毒活性成分的追蹤分離；單體化合物的結(jié)構(gòu)解析；單體化合物的細(xì)胞毒活性初步評(píng)價(jià)。 從采自中國南海的海

2、口、文昌、山口三個(gè)產(chǎn)地的33個(gè)紅樹林根莖樣品中，分離純化了173株內(nèi)生真菌。并采用集成化學(xué)與細(xì)胞毒活性相結(jié)合的篩選方法，對(duì)這173株內(nèi)生真菌的發(fā)酵產(chǎn)物同時(shí)進(jìn)行了化學(xué)多樣性及其細(xì)胞毒活性分析，發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生較好化學(xué)多樣性次生代謝產(chǎn)物的菌株44株，對(duì)小鼠白血病細(xì)胞株P(guān)388有不同程度細(xì)胞毒活性的菌株35株，兩者結(jié)合并通過HPLC指紋圖譜分析，最終確定天才菌株(Talented Strains)7株。其中菌株WC13－1與HK13－8的次生代謝產(chǎn)

3、物在用TLC和HPLC進(jìn)行的化學(xué)分析評(píng)價(jià)時(shí)發(fā)現(xiàn)其都對(duì)FeCl3呈陽性反應(yīng)，HK13－8在HPLC指紋圖譜分析時(shí)有一主要峰，為主要活性組分；WC13－1在HPLC指紋圖譜分析時(shí)呈現(xiàn)紫外吸收相似的系列吸收峰，表明存在系列結(jié)構(gòu)類似物。選定這兩株菌作為本論文的研究對(duì)象。 在考察了目標(biāo)菌株的培養(yǎng)條件后，對(duì)2株目標(biāo)活性菌進(jìn)行了大量發(fā)酵，得到發(fā)酵產(chǎn)物。采用薄層色譜，硅膠柱色譜，Sephadex LH－20柱色譜，反相高效液相色譜等分離手段，通

4、過解析波譜數(shù)據(jù)并結(jié)合理化常數(shù)闡明了從紅樹林內(nèi)生真菌一枝孢霉Cladosporium Sp.WC13－1的發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了25個(gè)化合物：trans－2，3－dihydro－2－methyl－4－methoxybenzopyran－5－ol(1)，(2r，3cis，4trans)－2，3－dihydro－2－methylbenzopyran－3，4，5－triol(2)，(2R+2S)－7－O－α－D－ribofuranosyl－2，3

5、－dihydro－5－h(huán)ydroxy－2－methybenzopyran－4－one(3+4)，7－O－αD－ribofuranosyl－5－h(huán)ydroxy－2－propylbenzopyran－4－one(5)，methyl3S－(2，3－dihydroxyphenyloxy)butyrate(6)，3S－(2，3－dihydroxyphenyloxy)butanoic acid(7)，(E threo)－laepta－4，6－die

6、n－2，3－diol(8)，(3E，8E，6S)－undeca－3，8，10－trien－1，6－diol(9)，trans－2，3－dihydro－2－methylbenzopyran－4，5－diol(10)，(±)－2，3－di hydro－5－h(huán)ydroxy－2－methyl－4H－1－benzopyran－4－one(11)，(±)－5，7－dihydroxy－2－methylchroman－4－orle(12)，1－(2，6

7、－dihydroxyphenyl)butan－1－one(13)，1－(2，6－dihydroxylphenyl)propan－1－one(14)，1－(2，6－dihydroxyphenyl)ethan－1－one(15)，N－(4－h(huán)ydroxylphenethyl)acetamide(16)，4－(2－h(huán)ydroxyethyl)benzaldehyde(17)，cyclo－(Pro－Leu)(18)，cyclo－(Val－Pro)

8、(19)，cyclo－(Pro－Ile)(20)，cyclo－(Tyr－Pro)(21)，cyclo－(Pro－Phe)(22)，1－(3－indolyl)－2，3－dihydroxypropan－1－one(23)，butyrolactone I(24)，2－butyryl－3，5－dihydroxycyclohex－2 en－1－one(25)；從Pencillium sp.HK13－8的發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了5個(gè)化合物：thymin

9、e(26)，uracil(27)，(22E，24R)－3β，5α，9α－trihydroxyergosta－7，22－dien－6－one(28)，ergosterol(29)，S－curvularin(30)。其中，酚性化合物1－7及不飽和脂肪醇8、9為新化合物。 利用MTT法、SRB法，對(duì)分離獲得的單體化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：酚性大環(huán)內(nèi)酯.彎胞霉素(30)具有中等程度的細(xì)胞毒活性，對(duì)HL－60細(xì)胞的IC5

10、0為2.56μM；酚性苯駢吡喃類新化合物1在100μM時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞BEL7402和HL－60的抑制率分別為86.97％和71.17％，IC50分別為47.9和77.0μM。利用DPPH法對(duì)單體化合物的抗氧化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：化合物1，6－7，10具有較強(qiáng)抗氧化活性，IC50分別為1.1，0.6，0.05，1.2μg/ml。化合物12－15，23具有較弱的抗氧化活性，IC50分布為20.7到71μg/ml之間。 綜上，本文