南中國海紅樹林內(nèi)生真菌抗菌活性研究.pdf

1、紅樹林是生長在熱帶海岸潮間帶的一種特殊植被，具有獨(dú)特的生理和生態(tài)特異性，使得在該環(huán)境中棲息的微生物具有豐富的生物多樣性。據(jù)報(bào)道，已經(jīng)從紅樹林植物中分離到大量的細(xì)菌、真菌、放線菌等，并從它們的次級(jí)代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)很多結(jié)構(gòu)新穎的化合物。 我國南海海岸是我國紅樹林的重要分布區(qū)。本論文采集了廣東省珠海市淇澳島-擔(dān)杠島紅樹林自然保護(hù)區(qū)和廣東省惠州市惠東縣白沙村、巽寮灣等地的真紅樹林、半紅樹林和伴生紅樹林植物的莖、葉、花、果實(shí)等樣品，采用添加

2、海水的PDA培養(yǎng)基對(duì)這些樣品中的內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離，共分離到紅樹林內(nèi)生真菌185株，其中在148株葉中分離得到，占總分離量的79.7％；20株在莖中分離得到，占總分離量的10.8％；從其他部位共分離到內(nèi)生真菌17株，占總分離量的9.19％。經(jīng)形態(tài)學(xué)的方法初步種屬鑒定，這些內(nèi)生真菌分別屬于3綱、7目、10科、39屬，表明這兩個(gè)海域的紅樹林內(nèi)生真菌具有豐富的多樣性。 在對(duì)分離到的海洋紅樹林內(nèi)生真菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒別的基礎(chǔ)上，本研究還采用

3、電噴霧離子化(ESI-MS)的方法初步探討了代謝組學(xué)在紅樹林內(nèi)生真菌種屬鑒別中的應(yīng)用。 本論文還采用濾紙片法，以大腸桿菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、黃曲霉為指示菌株，對(duì)分離自上述兩個(gè)海域的185株內(nèi)生真菌進(jìn)行了抗細(xì)菌、真菌活性篩選，結(jié)果得到：其中96株內(nèi)生真菌的培養(yǎng)液或菌體提取物至少對(duì)一種指示細(xì)菌有抑制作用，占總篩選菌數(shù)的51.8％；有71株內(nèi)生真菌的培養(yǎng)液或菌體提取物至少對(duì)一種指示真菌有抑制作用，占總篩選菌數(shù)的38.4％。鑒

4、于傳統(tǒng)抗菌活性篩選方法存在費(fèi)時(shí)、費(fèi)溶劑的弊端。本論文建立了一種簡單、快捷的微量提取方法用于抗菌活性篩選。我們采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以提取物重、抗白色念珠菌、抗金黃色葡萄球菌活性為考察指標(biāo)，對(duì)微量提取法中的條件進(jìn)行了研究。在主要考慮抗真菌活性的前提下，選擇最佳的提取條件為：提取片數(shù)為6片、(二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=2：3：1)混合溶劑做提取溶劑、超聲提取三次、每次20分鐘。在最佳提取條件下，采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)提取片數(shù)和相關(guān)的提

5、取物重量進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)在提取片數(shù)為7片，稀釋體積為400μL時(shí)可制的接近1mg/mL的篩選樣品。并用微量提取方法對(duì)29株內(nèi)生真菌的活性做了篩選，發(fā)現(xiàn)其中有6株對(duì)大腸桿菌有活性；1株對(duì)金黃色葡萄球菌有活性；3株對(duì)白色念珠菌有活性。篩選的陽性率與懸浮態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)得到的篩選樣品的陽性率相當(dāng)。 LF4-7L是來源于湛江紅樹林植物中的一種內(nèi)生真菌，經(jīng)拓?fù)洚悩?gòu)酶活性篩選發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤的活性。本研究對(duì)內(nèi)生真菌LF4-7L的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了