水葫蘆內(nèi)生菌的分離純化及其代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌能夠產(chǎn)生豐富多樣的次生代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)新穎、功能獨(dú)特、生物活性特殊，是新藥物、新化合物的潛在資源，引起了國(guó)內(nèi)外專家的高度重視。植物病原菌對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，農(nóng)藥的大量使用導(dǎo)致化學(xué)農(nóng)藥殘留問(wèn)題日益嚴(yán)重，使生態(tài)環(huán)境受到了極大的破壞與污染。而植物內(nèi)生菌次生代謝產(chǎn)物種類多、活性獨(dú)特，是尋找環(huán)境友好型新型農(nóng)藥的寶貴資源。本文采用組織分離法，分別以LB、PDA為分離培養(yǎng)基，從水葫蘆的根、莖、葉部分分離內(nèi)生菌，獲得7株內(nèi)生菌，其中包含

2、6株細(xì)菌和1株真菌。分別運(yùn)用乙酸乙酯和丙酮對(duì)7株內(nèi)生菌的發(fā)酵液和菌絲體進(jìn)行了粗提，使用高效液相色譜儀對(duì)乙酸乙酯相粗提物和丙酮相粗提物分別進(jìn)行HPLC檢測(cè);并以4株海洋細(xì)菌和2株農(nóng)業(yè)病原菌作為供試菌株對(duì)各級(jí)粗提物進(jìn)行了抑菌活性初步篩選，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌菌株C7次生代謝產(chǎn)物較豐富、抑菌活性較好。并以菌株C7為研究對(duì)象，進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物的分離與純化。得出結(jié)論如下;
　　 1.內(nèi)生菌的分離與鑒定;本論文采用組織分離法，以LB、PDA為分離培

3、養(yǎng)基，從水葫蘆的根、莖、葉部分分離得到了7株內(nèi)生菌，其中包含6株內(nèi)生細(xì)菌和1株內(nèi)生真菌。先對(duì)7株內(nèi)生菌的形態(tài)特征進(jìn)行了簡(jiǎn)單的觀察記錄，最后又對(duì)其乙酸乙酯提取物和丙酮提取物進(jìn)行了高效液相色譜(HPLC)分析，結(jié)果表明該7株菌各不相同，而且代謝產(chǎn)物豐富程度也不同。經(jīng)分子生物學(xué)鑒定菌株C7為匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)。
　　 2.7株內(nèi)生菌生物活性初步篩選;用濾紙片法測(cè)定了7株內(nèi)生菌C1、C2、C3、C4、C5

4、、C6、C7的乙酸乙酯相和丙酮相對(duì)2株農(nóng)業(yè)病原菌和4株海洋細(xì)菌的抑菌活性。測(cè)定結(jié)果表明C1、C2、C3、C4、C5菌株的乙酸乙酯相和丙酮相對(duì)供試菌株均無(wú)抑制性;C6菌株的乙酸乙酯相對(duì)金黃色葡萄球菌有微弱的抑制性，丙酮相對(duì)枯草芽孢桿菌有微弱的抑制性;C7菌株的乙酸乙酯僅對(duì)供試細(xì)菌都有一定的抑制活性。綜合以上分析，本實(shí)驗(yàn)選擇菌株C7作為后續(xù)研究對(duì)象。
　　 3.匍枝根霉次生代謝產(chǎn)物和生物活性研究;將匍枝根霉放大培養(yǎng)一個(gè)月，經(jīng)過(guò)溶劑浸