水葫蘆內生菌的分離純化及其代謝產物的初步研究.pdf

1、植物內生菌能夠產生豐富多樣的次生代謝產物，其結構新穎、功能獨特、生物活性特殊，是新藥物、新化合物的潛在資源，引起了國內外專家的高度重視。植物病原菌對農業(yè)生產構成了嚴重威脅，農藥的大量使用導致化學農藥殘留問題日益嚴重，使生態(tài)環(huán)境受到了極大的破壞與污染。而植物內生菌次生代謝產物種類多、活性獨特，是尋找環(huán)境友好型新型農藥的寶貴資源。本文采用組織分離法，分別以LB、PDA為分離培養(yǎng)基，從水葫蘆的根、莖、葉部分分離內生菌，獲得7株內生菌，其中包含

2、6株細菌和1株真菌。分別運用乙酸乙酯和丙酮對7株內生菌的發(fā)酵液和菌絲體進行了粗提，使用高效液相色譜儀對乙酸乙酯相粗提物和丙酮相粗提物分別進行HPLC檢測;并以4株海洋細菌和2株農業(yè)病原菌作為供試菌株對各級粗提物進行了抑菌活性初步篩選，發(fā)現(xiàn)內生真菌菌株C7次生代謝產物較豐富、抑菌活性較好。并以菌株C7為研究對象，進行次生代謝產物的分離與純化。得出結論如下;
　　 1.內生菌的分離與鑒定;本論文采用組織分離法，以LB、PDA為分離培

3、養(yǎng)基，從水葫蘆的根、莖、葉部分分離得到了7株內生菌，其中包含6株內生細菌和1株內生真菌。先對7株內生菌的形態(tài)特征進行了簡單的觀察記錄，最后又對其乙酸乙酯提取物和丙酮提取物進行了高效液相色譜(HPLC)分析，結果表明該7株菌各不相同，而且代謝產物豐富程度也不同。經分子生物學鑒定菌株C7為匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)。
　　 2.7株內生菌生物活性初步篩選;用濾紙片法測定了7株內生菌C1、C2、C3、C4、C5

4、、C6、C7的乙酸乙酯相和丙酮相對2株農業(yè)病原菌和4株海洋細菌的抑菌活性。測定結果表明C1、C2、C3、C4、C5菌株的乙酸乙酯相和丙酮相對供試菌株均無抑制性;C6菌株的乙酸乙酯相對金黃色葡萄球菌有微弱的抑制性，丙酮相對枯草芽孢桿菌有微弱的抑制性;C7菌株的乙酸乙酯僅對供試細菌都有一定的抑制活性。綜合以上分析，本實驗選擇菌株C7作為后續(xù)研究對象。
　　 3.匍枝根霉次生代謝產物和生物活性研究;將匍枝根霉放大培養(yǎng)一個月，經過溶劑浸