喜樹(shù)內(nèi)生真菌的分離及其代謝產(chǎn)物10-羥基喜樹(shù)堿的研究.pdf

1、本文以我國(guó)特有藥用植物喜樹(shù)(Camptotheca acuminate Decne)為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)喜樹(shù)內(nèi)生真菌的組織分布及分離方法進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，材料的表面消毒以75％乙醇和0.1％升汞結(jié)合的方法較好。對(duì)喜樹(shù)的根部和莖部的升汞消毒時(shí)間以4～5min為宜，喜樹(shù)葉子的升汞消毒時(shí)間應(yīng)控制在2min左右。在所試條件下共計(jì)分離得到38株內(nèi)生真菌，主要分布在樹(shù)葉(39.3％)和皮部(37.1％)，根部(15.9％)和種子(7.7％)中的內(nèi)生

2、真菌數(shù)目較少，在木質(zhì)部未分離到內(nèi)生真菌。 本文對(duì)10-羥基喜樹(shù)堿的薄層層析TLC條件及高效液相色譜HPLC檢測(cè)條件進(jìn)行了探討，確定了適合10-羥基喜樹(shù)堿的展開(kāi)劑為氯仿/甲醇(體積比9/1)；測(cè)定10-羥基喜樹(shù)堿的HPLC條件為：色譜柱：Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈—水(20:80)；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：266nm；流速：0.8mL/min。2株內(nèi)生真菌A5、A9的發(fā)酵產(chǎn)物中檢

3、出10-羥基喜樹(shù)堿。 利用傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)方法和ITS序列的測(cè)定以及系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)A5、A9進(jìn)行分類(lèi)鑒定，鑒定結(jié)果表明A5為Botryosphaeria berengeriana；A9為Diaporthe phaseolorum。 對(duì)菌株A9的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基組成進(jìn)行了初步優(yōu)化，優(yōu)化培養(yǎng)基組成為：2％葡萄糖、2.6％黃豆餅粉、0.3％磷酸二氫鉀、0.3％的七水硫酸鎂。最佳搖瓶培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基起始pH6.0，搖床轉(zhuǎn)速220r/