7-乙基-10-羥基喜樹堿磷脂的合成與組裝.pdf

1、7-乙基-10-羥基喜樹堿（7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin，SN38）是植物抗癌藥物喜樹堿（camptothecin，CPT）的一種衍生物，具有廣譜的體外抗腫瘤活性。然而，SN38在大部分生物相容和藥劑學(xué)上可接受的溶劑中都難溶解，不能直接應(yīng)用于臨床的治療。為了提高SN38的溶解度，探索潛在應(yīng)用，本論文構(gòu)建了一種兩親性SN38磷脂偶聯(lián)物，對(duì)其合成路線、理化性質(zhì)及體外抗腫瘤活性進(jìn)行初步研究，具體內(nèi)容如下:

2、>　　(1)SN38與甘油磷酰膽堿（L-α-Glycerophosphorylcholine，GPC）通過丁二酸酐連接得到7-乙基-10-羥基喜樹堿-磷脂偶聯(lián)物（Dual7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin-tailedglycerylphosphorylcholine conjugate，Di-SN38-GC）;利用HPLC、MS、NMR等表征手段檢測中間體7-乙基-10-羥基喜樹堿半琥珀酸酯（7-Ethyl-

3、10-hydroxycamptothecin-20-O-hemisuccinate，20-O-SN38）和目標(biāo)產(chǎn)物Di-SN38-GC的純度和結(jié)構(gòu)信息;考察了不同酯化體系、投料比、溫度和時(shí)間對(duì)獲得目標(biāo)產(chǎn)物反應(yīng)的影響，得出最優(yōu)化的反應(yīng)條件。結(jié)果顯示:中間體20-O-SN38及目標(biāo)產(chǎn)物Di-SN38-GC的純度分別為98.62％和98.76％; MS和NMR指示的分子結(jié)構(gòu)信息與理論相符;在以CDI/DBU為催化體系，反應(yīng)時(shí)間2h，反應(yīng)溫度3

4、5℃、投料比n20-O-SN38∶nCDI∶nGPC∶nDBU=1∶1.5∶0.4∶1（摩爾比）的條件下合成Di-SN38-GC的收率最高，為9.7％。
　　(2)利用薄膜分散法制備Di-SN38-GC脂質(zhì)體;通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定了Di-SN38-GC在室溫下的平衡溶解度;通過電導(dǎo)率法研究Di-SN38-GC偶聯(lián)物的臨界聚集濃度(CAC);以動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和透射電鏡(TEM)確定Di-SN38-GC脂質(zhì)體的粒徑分布Zeta電位

5、和微觀形貌。結(jié)果顯示:Di-SN38-GC在純水中的溶解度為426μg/mL，遠(yuǎn)高于原藥SN38的溶解度（7μg/mL），一定程度克服了原藥水溶性差的缺點(diǎn);兩親性Di-SN38-GC偶聯(lián)物在水體系中具有自組裝能力，其CAC為53μg/mL;該偶聯(lián)物脂質(zhì)體粒徑分布較窄，平均直徑為159 nm，Zeta電位為-21.6 mV，推測具有良好的穩(wěn)定性;冷凍透射電鏡顯示，脂質(zhì)體具有雙分子層結(jié)構(gòu)，符合一般脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)特征。
　　(3)利用細(xì)胞

6、毒性實(shí)驗(yàn)(MTT)評(píng)估Di-SN38-GC偶聯(lián)物的體外抗腫瘤活性。結(jié)果顯示，Di-SN38-GC對(duì)HepG-2細(xì)胞、HeLa細(xì)胞和HT-29細(xì)胞的IC50分別為35μg/mL、17μg/mL、26μg/mL，均表現(xiàn)了其良好的抗腫瘤活性。表明磷脂修飾對(duì)SN38的抗腫瘤活性無明顯影響。
　　(4)利用多肽固相合成法(SPPS)合成20肽抗凝血藥物比伐盧定;考察合成過程中不同保護(hù)氨基酸耦合的條件。結(jié)果顯示，比伐盧定的前端十肽及最終產(chǎn)物的