黃帚橐吾內(nèi)生真菌的分離鑒定及其代謝產(chǎn)物抑菌活性研究.pdf

1、內(nèi)生真菌是一個(gè)新的有待開(kāi)發(fā)的微生物資源。不僅能從傳統(tǒng)的藥用植物中分離到有益內(nèi)生真菌，在一些特殊環(huán)境下生長(zhǎng)的其它植物也發(fā)現(xiàn)大量產(chǎn)活性代謝產(chǎn)物內(nèi)生真菌，內(nèi)生真菌對(duì)提高作物固氮、生物防控等方面起著重要的作用。
　　本課題選擇黃帚橐吾為研究對(duì)象，對(duì)植株的根、莖、葉三種組織的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離純化及初步鑒定。選用沙門(mén)氏桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌三種病原細(xì)菌為供試菌，研究黃帚橐吾內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的抑菌活性以及熱、PH、紫外光對(duì)發(fā)酵液抑菌活性

2、穩(wěn)定性的影響;并對(duì)其抑菌活性較好的菌株進(jìn)行了分子鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化，研究結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)組織分離法，采用PDA、MEA和察氏3種分離培養(yǎng)基，共分離純化得到黃帚橐吾內(nèi)生真菌67株，從分布情況來(lái)看，根部分離最多為36株，莖、葉分別得到19株和12株，經(jīng)典形態(tài)學(xué)分類(lèi)方法進(jìn)行初步鑒定，它們分屬于5目5科9屬，其中木霉屬和鐮孢屬為優(yōu)勢(shì)菌屬。
　　2.對(duì)18株代表菌株發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性篩選研究發(fā)現(xiàn)，有14株菌對(duì)至少一種供試細(xì)菌具有

3、抑菌活性(抑菌圈＞8mm)，占總數(shù)的77.78％。其中，27.78％對(duì)E.coli具有較好抑菌活性(抑菌圈＞12mm)，16.67％對(duì)Salmonella具有較好抑菌活性，44.44％對(duì)S.aureus具有較好抑菌活性。對(duì)抑菌活性最好的菌株N2進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子鑒定確定其分類(lèi)地位，為半知菌門(mén)、絲孢目、叢梗孢科、木霉屬、棘孢木霉，最終定名為T(mén)richoderma asperellum LB-N2(Accession No: KM207842

4、)。
　　3.黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2發(fā)酵液穩(wěn)定性結(jié)果顯示:抑菌活性成分熱穩(wěn)定性一般，60℃以下具有較好的穩(wěn)定性，在中性偏弱酸環(huán)境穩(wěn)定性最佳，紫外光照對(duì)發(fā)酵液影響較小，不同時(shí)間紫外光照下發(fā)酵液活性基本保持一致。
　　4.對(duì)碳源和氮源的選擇上，黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2對(duì)小分子類(lèi)碳源和有機(jī)氮源的利用率最高，在此培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最快。
　　5.對(duì)黃帚橐吾內(nèi)生真菌N2發(fā)酵液使用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯三種不同極性試劑萃取，研究結(jié)果表明，N