溫莪術(shù)內(nèi)生真菌誘變株M7226的發(fā)酵及其代謝產(chǎn)物的分離純化.pdf

1、目的:
　　以溫莪術(shù)活性內(nèi)生真菌EZG0807經(jīng)超導(dǎo)磁體模擬重力環(huán)境誘變后的菌株M7226為研究對(duì)象，通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化法對(duì)其發(fā)酵條件（發(fā)酵溫度、初始pH值和發(fā)酵時(shí)間）進(jìn)行優(yōu)化，更大程度發(fā)揮其積累代謝產(chǎn)物的潛力;并在最佳發(fā)酵條件下，對(duì)菌株M7226進(jìn)行大量搖瓶發(fā)酵，通過(guò)對(duì)發(fā)酵液性質(zhì)的初步研究，選擇合適的分離純化方法，從而分離純化出具有生物活性的單體化合物。
　　方法:
　　采用響應(yīng)面分析法中的Box-BehnkenDesi

2、gn(BBD)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，確定影響因素和因素水平從而獲得最佳發(fā)酵條件，然后在此條件下進(jìn)行大量發(fā)酵;為了方便后續(xù)分離純化，我們先進(jìn)行了發(fā)酵液的pH和溫度穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究;采用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)發(fā)酵液的石油醚相、氯仿相和正丁醇相進(jìn)行了抑菌活性研究，并利用顯色試驗(yàn)推測(cè)物質(zhì)的大概類型。最后采用硅膠、SephadexLH20、大孔樹(shù)脂和ODS等柱層析分離方法對(duì)菌株M7226的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，并通過(guò)UV、IR、MS、1H和13CNMR等波譜對(duì)分離

3、得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化法BBD試驗(yàn)，確定菌株M7226的最佳發(fā)酵條件是發(fā)酵溫度29℃，初始pH值6.8，發(fā)酵時(shí)間10d;
　　2.pH和溫度穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示菌株M7226發(fā)酵液對(duì)溫度不敏感，但對(duì)酸性條件比較敏感;抑菌實(shí)驗(yàn)顯示發(fā)酵液的氯仿相和正丁醇相對(duì)四種指示細(xì)菌有抑制效果，石油醚相沒(méi)有活性;
　　3.菌株M7226的代謝產(chǎn)物經(jīng)硅膠、SephadexLH20、大孔樹(shù)脂和OD