一株杜仲內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化活性研究.pdf

1、本研究以藥用植物杜仲Eucommia ulmoides Oliver 為研究材料，進(jìn)行了內(nèi)生真菌抗氧化活性菌株的分離、篩選和鑒定，對(duì)其中活性最強(qiáng)的菌株進(jìn)行了發(fā)酵產(chǎn)物的純化；研究了其發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化活性的變化和穩(wěn)定性；研究了對(duì)超氧陰離子自由基、羥基自由基和有機(jī)自由基DPPH的清除效果；研究了體外抗脂質(zhì)過氧化和抑制氧化溶血的藥理作用；以果蠅為模型研究了對(duì)生物體持水能力、耐饑餓能力和壽命影響的藥效作用。結(jié)果如下：
　　 1、采用組織分離

2、法，從杜仲葉片組織中分離得到一批內(nèi)生真菌菌株，對(duì)其中的232株內(nèi)生真菌采用總抗氧化能力測試盒進(jìn)行活性菌株的篩選，從中選出抗氧化活性較高的一株菌No.173，根據(jù)形態(tài)分類和rDNA ITS 序列分析對(duì)菌種進(jìn)行了鑒定，確定為球毛殼菌Chaetomium globosum Kunze。
　　 2、采用總抗氧化能力測試盒評(píng)價(jià)了6種大孔吸附樹脂（AB-8 樹脂、X-5 樹脂、D101 樹脂、NKA-9 樹脂、HPD-100 樹脂、HPD-

3、600 樹脂）對(duì)杜仲內(nèi)生球毛殼Ch.
　　 Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物的純化效果，結(jié)果顯示經(jīng)NKA-9 樹脂純化的提取物的總抗氧化活性極顯著高于其他5種樹脂（P<0.01），NKA-9 樹脂純化得到提取物的總抗氧化活性幾乎比純化前提高了一倍（從20.70 U/mL 提高至39.23 U/mL）。
　　 NKA-9 樹脂對(duì)杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物有很好的純化效

4、果，所以被選用作為純化樹脂。
　　 3、采用鐵氰化鉀還原力測定法、β-胡蘿卜素/亞油酸模型和碘量法評(píng)價(jià)了杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物的抗氧化活性及其穩(wěn)定性；采用Folin-Ciocalteu 法測定杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物的總多酚含量。結(jié)果表明，其抗氧化能力與Vc基本相當(dāng)，且抗氧化活性穩(wěn)定性較好；多酚含量為(255.53±1.38）mg/g（以沒

5、食子酸計(jì)），且多酚含量的變化與抗氧化活性具有相關(guān)性，是主要的抗氧化活性成分。
　　 4、采用DPPH 實(shí)驗(yàn)、光照核黃素體系和亞甲藍(lán)光度法評(píng)價(jià)杜仲內(nèi)生球毛殼Ch.
　　 Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物清除有機(jī)自由基（DPPH）、超氧陰離子自由基（O2-·）和羥基自由基（·OH）的能力。結(jié)果表明，杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物有很好的清除自由基的能力，在相同濃度下，清除D

6、PPH 自由基、超氧陰離子自由基（O2-·）的效果好于陽性對(duì)照（Vc），而清除羥基自由基（·OH）的能力則較差。
　　 5、對(duì)杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物進(jìn)行了抗脂質(zhì)過氧化和抑制小鼠紅細(xì)胞氧化溶血的研究。結(jié)果表明，杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物對(duì)小鼠肝、腎、心和脾組織的脂質(zhì)過氧化的抑制效果隨著發(fā)酵液提取物濃度的增加而不斷增強(qiáng)。1 mg/mL的濃度對(duì)小鼠

7、心和脾兩種組織脂質(zhì)自發(fā)過氧化的抑制率分別為71.55％和71.68％，對(duì)H2O2 誘導(dǎo)的肝組織脂質(zhì)過氧化的抑制率達(dá)到92.50％；0.3 mg/mL的濃度對(duì)小鼠紅細(xì)胞自氧化溶血的抑制率為68.48％，對(duì)H2O2 誘導(dǎo)的小鼠紅細(xì)胞氧化溶血的抑制效果則隨著濃度的提高而增強(qiáng)；0.75 mg/mL 濃度的抑制率達(dá)到96.12％。
　　 6、以杜仲內(nèi)生球毛殼Ch. Globosum菌株No.173 發(fā)酵液提取物喂食果蠅，研究對(duì)果蠅持水能力