紫薯、麻黃內(nèi)生真菌及發(fā)酵產(chǎn)物活性研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是一個(gè)龐大的微生物系統(tǒng)，其發(fā)酵產(chǎn)物能產(chǎn)生多種與宿主植物相同或相似的活性成分，已成為人們尋找新型藥物的重要來源。本課題以紫薯和麻黃為研究對(duì)象，分離出內(nèi)生真菌，對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤、抑菌、抗氧化活性研究，篩選出高活性菌株。
　　采用組織塊分離法，以PDA為分離培養(yǎng)基，分別從紫薯和麻黃中分離得到14株和59株內(nèi)生真菌。通過菌落形態(tài)觀察和顯微鑒定，對(duì)照《真菌鑒定手冊(cè)》，對(duì)10株產(chǎn)孢的紫薯內(nèi)生真菌和20株產(chǎn)孢的麻黃內(nèi)生真菌進(jìn)行

2、鑒定。紫薯內(nèi)生真菌鑒定結(jié)果:赤霉屬(Gibberella)8株、鏈格孢屬(Alternaria)1株、聚孢霉屬（Glomerularia）1株;麻黃內(nèi)生真菌鑒定結(jié)果:鏈格孢屬(Alternaria)7株、青霉屬(Penicillium)6株、聚孢霉屬(Glomerularia)4株、頭孢霉屬（Cephalosporium）1株、單梗頭孢霉屬(Corethropsis)1株、鞭孢霉屬（Masti gosporium）1株。
　　對(duì)紫

3、薯和麻黃中分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵液依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，菌絲體用甲醇提取，紫薯得42個(gè)樣品、麻黃得177個(gè)樣品。
　　用MTT法，以人肺腺癌細(xì)胞株A549和人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721為受試瘤株，對(duì)紫薯內(nèi)生真菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤活性研究，結(jié)果顯示，對(duì)A549細(xì)胞株抑制率大于50％的有10個(gè)樣品，其中抑制率最高的為ZS102的菌體部位，抑制率為66.56％。對(duì)SMMC-7721細(xì)胞株的抑制率相對(duì)較弱，抑制率最高的

4、為ZS301的菌體部位，其抑制率為46.64％。
　　以G+性菌（金黃色葡萄球菌、地衣芽孢桿菌、乳鏈球菌）、G-性菌（大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯菌）為6種指示菌，用濾紙片法對(duì)紫薯和麻黃內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抑菌活性研究，用二倍稀釋法對(duì)活性較好的樣品進(jìn)行最小抑菌濃度測(cè)定。結(jié)果表明，紫薯的42個(gè)樣品中，有17個(gè)樣品對(duì)6種指示菌都有抑制作用，占總測(cè)試樣品的40％;麻黃的177個(gè)樣品中，有53個(gè)樣品對(duì)6種指示菌都有抑菌活性，占29.9％

5、。
　　對(duì)紫薯和麻黃內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化活性研究，測(cè)定指標(biāo)為總還原能力、對(duì)二苯代苦味?；杂苫?DPPH·)的清除作用和對(duì)羥自由基的清除作用。紫薯內(nèi)生真菌抗氧化結(jié)果顯示:41個(gè)樣品表現(xiàn)出不同程度的總還原力;26個(gè)樣品表現(xiàn)出DPPH自由基清除活性，占61.9％;40個(gè)樣品表現(xiàn)出羥自由基清除活性。麻黃內(nèi)生真菌抗氧化結(jié)果表明:152個(gè)樣品表現(xiàn)出一定的總還原能力，占樣品總數(shù)的85.8％;107個(gè)樣品對(duì)DPPH·有清除活性，占60.4％;

6、99個(gè)樣品有羥自由基清除活性，占55.9％。
　　運(yùn)用薄層層析、柱層析、重結(jié)晶等方法對(duì)菌株ZS301的乙酸乙酯部位進(jìn)行分離，得到1個(gè)化合物，經(jīng)鑒定，為sapinofuranone B。
　　對(duì)抗腫瘤、抑菌、抗氧化活性相對(duì)較好的20（紫薯9株，麻黃11株）株內(nèi)生真菌進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果表明，紫薯9株內(nèi)生真菌中，7株為赤霉菌屬(Gibberella)，1株為間座殼屬(Diaporthe)，1株為非培養(yǎng)子囊菌的同源菌。麻黃11