核桃內(nèi)生菌發(fā)酵產(chǎn)物生物活性及花序的化學(xué)成分研究.pdf

1、核桃(Juglans regia)系胡桃科核桃屬(Juglans)植物，別稱胡桃，羌桃，屬于落葉喬木、深根性、喜溫樹(shù)種。分布于我國(guó)陜西、甘肅、云南、四川、河北等地區(qū)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)核桃花序乙醇提取物生物活性及化學(xué)成分，核桃根、莖、葉的內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物的活性進(jìn)行了研究，研究結(jié)果如下：
　　第一，采用濾紙片法研究核桃花序乙醇提取物抑菌活性，結(jié)果表明，核桃花序乙醇提取物中的抑菌活性成分主要分布在乙酸乙酯部位。采用DPPH自由基清除活性測(cè)定法

2、、總還原力測(cè)定法和羥基自由基清除活性測(cè)定法研究了核桃花序乙醇提取物抗氧化活性，DPPH自由基和羥基自由基清除活性測(cè)定結(jié)果顯示，抗氧化活性成分主要集中在中等極性的乙酸乙酯部位；而總還原力測(cè)定結(jié)果顯示，抗氧化活性成分主要集中在極性較大的正丁醇部位。采用多種現(xiàn)代色譜分離手段和現(xiàn)代波譜技術(shù)對(duì)核桃花序的化學(xué)成分進(jìn)行研究，共分離得到9個(gè)化合物，鑒定了其中的7個(gè)，它們分別是1-(1-甲基-丁-3-烯基)-2-(1,1-二甲基-丙氧基)-4-甲苯(1)

3、、β-谷甾醇(2)、4,8-二羥基-1-四氫萘醌(3)、(Z)-7-乙酰-甲基-11-甲基-3-亞甲基-十二碳-1,6,10-三烯(4)、2S,3S,4 S-三羥基戊酸(5)、3-甲氧基-2-[3-羥基苯基]-4H-呋喃[2,3-H]-1-苯并吡喃-4-酮(6)、槲皮素-3-O-(2''-β-D-吡喃葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷(7)。
　　第二，采用組織分離法對(duì)核桃根、莖、葉的內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離，共分離得到19株內(nèi)生真菌，其中根

4、部7株，莖部5株，葉部7株。對(duì)其中產(chǎn)孢子的8株內(nèi)生菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。結(jié)果表明，它們分屬于鏈格孢屬 Fusarium(2株)、串珠霉屬 Monilia(1株)、側(cè)孢霉屬 Sporotrichum(1株)、曲霉屬(Aspergillus)(1株)、青霉屬Penicillium(2株)和微囊菌屬M(fèi)icroascus（1株）共6個(gè)屬，叢梗孢目(Miniliales)和微囊菌目(Microascales)2個(gè)目，涉及絲孢綱(Hyphomycete

5、s)、真子囊菌亞綱(Euascomycetes)，為后續(xù)內(nèi)生菌及發(fā)酵產(chǎn)物活性研究提供了豐富材料。
　　第三，分別采用濾紙片法，DPPH自由基清除法、羥自由基清除法和總還原力法對(duì)核桃內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物做體外抑菌活性、抗氧化活性研究。抑菌研究結(jié)果表明，乙酸乙酯部位活性較好的菌株有6株，占總菌株的31.57％，根部活性菌株最多，其中R-401(根)對(duì)5種指示菌都有很強(qiáng)的抑制活性，對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、肺炎鏈球菌最小抑菌濃度均達(dá)到了0

6、.313 mg/mL，而S-101(莖)有較強(qiáng)的抑菌作用，對(duì)地衣芽孢桿菌最小抑菌濃度為0.313 mg/mL，而正丁醇部位抑菌活性較弱，其中活性較好的為L(zhǎng)-102，對(duì)綠膿桿菌、肺炎鏈球菌的抑菌活性最強(qiáng)，最小抑菌濃度都達(dá)到0.625 mg/mL，而S-101對(duì)地衣芽孢桿菌的最小抑菌濃度也為0.625 mg/mL。乙酸乙酯部位抗氧化活性結(jié)果表明，DPPH自由基清除活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，19個(gè)樣品均有不同程度的清除能力，其中有9個(gè)樣品有較強(qiáng)的清除率

7、，占總數(shù)的47.36%?？傔€原力測(cè)定結(jié)果表明，19個(gè)樣品均表現(xiàn)出還原力，其中R-401的維生素C相當(dāng)含量為157.66μg/mg，其它樣品的維生素C相當(dāng)含量都小于100μg/mg。羥基自由基活性測(cè)定結(jié)果表明，核桃內(nèi)生菌對(duì)羥基自由基的清除能力較弱，只有R302、S-101的清除率大于50%，分別為71.86%、53.09%。正丁醇部位抗氧化活性較弱。
　　以上研究結(jié)果表明，核桃花序化學(xué)成分豐富多樣，核桃內(nèi)生真菌種群繁多，發(fā)酵產(chǎn)物具有